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(無題) 削除/引用 No.11363-5 - 2023/04/13 (木) 11:25:54 - あああ FITCは退色が早いので顕微鏡観察には向きません（できなくはないですけれど、相当強く染まらないとあっという間に暗くなります） PE-cy5は普通、顕微鏡観察には使いません。励起がFITCレーザーですし、特殊な分光が必要なためです。 高額な顕微鏡があればできますけれど。 素直に、同じ抗体クローンを顕微鏡観察用に蛍光標識した試薬を買い直した方が早いと思います。

(無題) 削除/引用 No.11363-4 - 2023/04/13 (木) 10:50:48 - kit 論文を見たらわかりますが、よくやられていますよ。

(無題) 削除/引用 No.11363-3 - 2023/04/13 (木) 08:59:03 - -- FCM用の直接標識抗体の多くはモノクロでしょうから、元のモノクロ抗体がIFに使用されているのかクローンIDで調べてみれば抗体が使えるかどうか（非特異とか固定とかの問題とかに関して）は確認できるでしょう。他メーカーも含めて非標識抗体が販売されていなければご自身で試してみるしかありません。 FITCは昔はIFによく使われていました。今は蛍光強度が高く退色しにくい色素が使われることが多いですが、極端にシグナルが弱いわけでなければ大丈夫でしょう。 PE、Cy5単独の色素はIFに使用したことがありますが、タンデムはわかりません。顕微鏡のフィルターが対応していれば大丈夫だと思います。共焦点なら励起レーザーと検出波長は任意に選択できるでしょうから使える可能性は高いでしょう。FCMで使う色素は退色が早いものもありますので、その点には気をつける必要があります。 検出できなかった場合にその原因が標識の問題なのであれば、通常のIFと同じように蛍光標識二次抗体を使用すれば良いです。あるいはanti-FITC抗体などもあるので蛍光標識anti-FITCを使うとかも可能です。

(無題) 削除/引用 No.11363-2 - 2023/04/12 (水) 17:28:55 - 774R フローサイトメトリーと同じ条件で生細胞の細胞表面の抗原を染色する分には問題ないと思います。 しかし、細胞を固定して染色する場合、抗体が細胞内の物質（タンパク質やその他あらゆる物）にアクセス可能になるため、非特異的シグナルが出る可能性が高まります。 もう一つの懸念は、細胞を固定することによってタンパク質の抗原性が失われてしまう可能性です。 ただ、その抗体がフローサイトメトリーにしか適用がなかったとしても、他のアプリケーションをテストしていないだけで、実は使える可能性もあります。

フローサイト用抗体での免疫染色 削除/引用 No.11363-1 - 2023/04/12 (水) 17:06:51 - たぬき フローサイトメトリー用の蛍光標識抗体で、培養細胞の免疫染色をしたいのですが、条件検討難しいのでしょうか？ FITC標識、PE-Cy5標識の抗体を使って、培養細胞のフローサイトメトリーがうまくできました。 なので、この抗体を使って、直接法の免疫染色できないかと思っています。 この抗体メーカーに問い合わせたところ、フローサイトメトリー用のプロトコルしかなく、 免疫染色用としては、自身で条件検討してくださいとのことでした。 免疫染色の経験がなく、これがどれほど難しい、大変なのか、全く検討がつかないのですが、 これは難しいのでしょうか？ FITC、PE-cy5は、免疫染色で一般的に用いられる蛍光なのでしょうか？

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