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バッファーの作り方 トピック削除
No.11325-TOPIC - 2023/03/31 (金) 18:57:22 - 学部生
バッファーの作り方に関する質問です。
例えば、50 mM リン酸-Na, 500 mM NaCl, 500 mM イミダゾール pH7.3のような緩衝液を作成する際、どのようにして作成していますか。
予め、500 mM リン酸-Na (pH7.3) のストック溶液にNaClやイミダゾールを加えて、メスアップしたとき、最終的なpHがずれてしまった場合、どのようにすればよいでしょうか。
初歩的な質問で申し訳ありませんが、よろしくお願いします。
 
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No.11325-9 - 2023/04/01 (土) 14:56:19 - おお
>[Re:7] LPSさんは書きました :
> 2ナトからリン酸で合わせる事はしたことがないですねえ
濃リン酸とか1Nリン酸で合わすとリン酸濃度変わっちゃうよ。同じ濃度のリン酸ならかわらないけど。

(無題) 削除/引用
No.11325-8 - 2023/04/01 (土) 07:18:09 - おお
イミダゾール自身pH7あたりでバッファーとして使えるのでわざわざリン酸いるか?っていう気もしてきている。イミダゾール溶液をHClで中性付近まで下げればリン酸がなくてもバッファーとして充分のような気がしてきている。

(無題) 削除/引用
No.11325-7 - 2023/04/01 (土) 04:56:41 - LPS
そうでした。1ナトにNaOHでPH調整してました。2ナトからリン酸で合わせる事はしたことがないですねえ

(無題) 削除/引用
No.11325-6 - 2023/04/01 (土) 03:01:48 - おお
>[Re:5] LPSさんは書きました :
> リン酸バッファーのPHハ、1ナトと2ナトを使って合わせるのが基本では?蛇足ながら

基本とまでは言っていいかわからないですが、、、たとえばリン酸や、リン酸1ナトにNaOHを加えても、同じ濃度の2ナトを加えても結果は同じですから。1ナトと2ナトを混ぜるのはある意味簡便法といえるかもしれません。

ただ今回の場合イミダゾールが結構な濃度入っているのでイミダゾールが解けた状態でpHを合わせないとpHのずれがそれなりに生じるだろうし、1ナトと2ナトの量比も変わるだろうからうまく作れないっていう可能性も出てくる。

(無題) 削除/引用
No.11325-5 - 2023/04/01 (土) 02:35:46 - LPS
リン酸バッファーのPHハ、1ナトと2ナトを使って合わせるのが基本では?蛇足ながら

(無題) 削除/引用
No.11325-4 - 2023/04/01 (土) 02:23:58 - おお
イミダゾールはそのまま溶かすとpHが9以上で濃度も非常に高いですから500 mM リン酸-Na (pH7.3) のストック溶液を使わずにすべての粉末を混ぜて溶かしてから、pHを合わせて最後に容量を合わせるといいかと思います。

500 mM リン酸-Na (pH7.3) のストック溶液を使ってpHがずれたから直すというのは、たとえばバッファーを作っているときにNaOHを入れすぎたから、HClを入れて戻すみたいなやり方(どんどん塩濃度が高くなる)に似ていて気持ち悪いです。

実際の実験としては500 mM リン酸-Na (pH7.3) のストック溶液にイミダゾール、NaClを加えてpHを合わさないで使ってもそんなに支障がないことが多いのではないかとは思います。まあリン酸-Naの濃度を思い切って100mM以上にするとよりpHが動かないので安心かもしれません。

いっそのことイミダゾールーリン酸バッファーにしたらええんとちゃうかなんて思えたりもします。

(無題) 削除/引用
No.11325-3 - 2023/03/31 (金) 22:06:27 - 2
ズレたら1xの濃度で再調整したほうがいいとおもいますが、問題になる程おおきくズレることはあまりないようにおもいます。
ただ、PBSのように1xと10xでpHが違うbufferは注意したほうがいいですね。(x10だとpH6.8くらいだがここでpHを7.4に調整してしまうと、1xにしたとき7.8くらいになる。なので10xはpH調整しない)

(無題) 削除/引用
No.11325-2 - 2023/03/31 (金) 20:00:01 - 774
pHメーターと適当な濃度のHCl、NaOHで合わせながらメスアップするものでは?

学部生ならこんなところで聞いて調べた気にならず、指導教員にpHメーターの使い方、毒劇物の管理についても教わりながらやって下さい。

バッファーの作り方 削除/引用
No.11325-1 - 2023/03/31 (金) 18:57:22 - 学部生
バッファーの作り方に関する質問です。
例えば、50 mM リン酸-Na, 500 mM NaCl, 500 mM イミダゾール pH7.3のような緩衝液を作成する際、どのようにして作成していますか。
予め、500 mM リン酸-Na (pH7.3) のストック溶液にNaClやイミダゾールを加えて、メスアップしたとき、最終的なpHがずれてしまった場合、どのようにすればよいでしょうか。
初歩的な質問で申し訳ありませんが、よろしくお願いします。

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