Bio Technical フォーラム

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共焦点顕微鏡撮影でディッシュ間の蛍光強度の比較は可能か トピック削除
No.11322-TOPIC - 2023/03/31 (金) 17:03:29 - はま
私の所属するラボで細胞実験系を立ち上げて間もない状態で、分からないことがありましたため質問させてください。

染色試薬を用いて共焦点レーザー顕微鏡撮影を行ったのですが、複数のディッシュ間での蛍光強度の比較をしても良いのか教えてください。
撮影条件は全てのディッシュで同じにしております。

稚拙な質問で申し訳ありません。
どうぞよろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.11322-5 - 2023/04/01 (土) 11:54:31 - はま
皆様ありがとうございます。

ディッシュ間の単純な比較は難しそうですね。

ちなみに、1つのディッシュについてタイムラプス撮影を行ったとして 0 min と 60 min における特定の細胞の蛍光強度(輝度)の比較はOKという認識なのですが、大丈夫でしょうか。

(無題) 削除/引用
No.11322-4 - 2023/04/01 (土) 03:19:42 - おお
比較するにあたって正確な数値が出ているかという不透明な部分を認めた上なら比較は可能だということだと思います。だからそれ以上でもそれ以下でもない。

たとえば人なんかの場合、それぞれの個体の遺伝的バックグランド、環境によるバックグランドが違うのに比較をしているわけです。この場合はある程度そろえれるところは揃えて(年齢、男女比)、あとは数で勝負するといった感じです。

顕微鏡で蛍光を見る場合、数は莫大に増やせませんが、ある程度は増やしたりできますのでうまくぶれそうな要因を均一化していると思えるような観察の仕方をして、データーとしていいと思います。これは冒頭に書きましたように不透明な部分を認めたうえでのデーターで、その認識の上で否定できるものではありません。

人(臨床)のデーターの比較で書きましたが、基礎の実験では蛍光顕微鏡ででた結果の裏付けをするような実験も組めることが多いので、そういう実験をデザインしてデーターを強化することになると思います。

(無題) 削除/引用
No.11322-3 - 2023/03/31 (金) 21:56:51 - toto
全く勧めないですが、どうしてもというならば、まず1つのディッシュで測定して、その上にごく薄い蛍光溶液を入れて、フォーカスをその溶液の中にあげて、できればZ stackを撮っておいて、もう一つのディッシュでも全く同じようにする、そして、両者の溶液部分の蛍光強度を1としたときの細胞の蛍光強度を比較する、とかかな。これでどこか問題がありますかね?

(無題) 削除/引用
No.11322-2 - 2023/03/31 (金) 21:38:03 - あの
定性的な方法であって、定量的な方法ではないにで、
よっぽど極端な違いがあるとき以外には、難しいと思います。

判定量できるみたいなことを言っている論文があるのは知っていますが。

共焦点顕微鏡撮影でディッシュ間の蛍光強度の比較は可能か 削除/引用
No.11322-1 - 2023/03/31 (金) 17:03:29 - はま
私の所属するラボで細胞実験系を立ち上げて間もない状態で、分からないことがありましたため質問させてください。

染色試薬を用いて共焦点レーザー顕微鏡撮影を行ったのですが、複数のディッシュ間での蛍光強度の比較をしても良いのか教えてください。
撮影条件は全てのディッシュで同じにしております。

稚拙な質問で申し訳ありません。
どうぞよろしくお願いいたします。

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