お世話になります。
最近、動物棟の方にマウスのAAVのintrathecal injectionをお願いしました。試験は５週のマウスにAAVを投与して１３週で発現や局在を解析するという一般的な試験ですが、２４匹中２匹、異常に発現が高いマウスがいました。spinal cordのウェスタンでは他はうっすらとしか発現が確認できないのですが、この２匹は白抜けするぐらい発現が高いです。qPCRでウイルスのgene (AAV2)のtaqman assayをspinal cordで行うと、他の２２匹にくらべて一つは５００倍、もう一つは1000倍も高く検出されました。この２匹はともにほかのマウスに比べて体重が低いです。injectionをお願いした方に聞いても同じように投与したと言っておりますが、何かが違うからこのような違いが出たと考えております。
質問ですが、このような違いを生じるの可能性としてどのようなことがあるのでしょうか？考えられる可能性として、まずサンプルの調整が間違ったことを考えましたが、spinal cordを採取いただきそれを切り刻みhomogenizeしておりますので可能性は低いです。loading controlに違いはなかったです。他には微妙な投与サイトが異なる、AAVが凝集して濃度が異なる（可能性は低いと思いますが）などを考えておりますが、他に何か可能性がございましたらぜひ教えてください。 |
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