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TRAP/ALP二重染色の緩衝液 トピック削除
No.11245-TOPIC - 2023/03/05 (日) 02:33:35 - ルリ子
TRAP染色とALP染色の二重染色が出来るキットを購入しましたが、プロトコールに
0.1mol/L AMPD-HCL buffer (pH9.4) に10分浸漬する過程が入っています。
TRAP染色の後に切片を中和するのが目的だと思いますが、このようなバッファーを持っていないので、困っています。
緩衝液は全て出来合の物を購入しており、このような強アルカリのバッファーはありませんでした。
この一工程のためだけに一式購入して自作しなければならないのでしょうか・・・。
何か他の緩衝液で代用できないものでしょうか。
お教えいただければ大変助かります。
どうぞよろしくお願いいたします。
 
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お返事ありがとうございました。 解決済み 削除/引用
No.11245-5 - 2023/03/06 (月) 12:52:42 - ルリ子
おお様、G-25様、有り難うございました!

購入すると高いのでビックリしました。
自作した方が良さそうですね・・。
二重染色を諦めて別々にやればこの過程は必要じゃ無いので、別々にやるか、
バッファーを安上がりに自作するか、Trisでやるか、色々試してみたいと思います。
単純に中和だと思ってしまったので目から鱗でした。

(無題) 削除/引用
No.11245-4 - 2023/03/05 (日) 20:35:44 - おお
pH 9あたりだったらアミノ酸使えば十分そうにも思えてきた。ホウ酸でもいけるかも。

(無題) 削除/引用
No.11245-3 - 2023/03/05 (日) 18:52:28 - G25
中和のためというより、アルカリフォスファターゼ反応の至適pHにするためじゃないですか?
アルカリフォスファターゼの反応液には、コンベンショナルにはTrisバッファを使っていたものですが、Trisのバッファ域の限界に近いので、理屈から言ってpKaのやや高いAMPDのほうがいいってことなんじゃないでしょうか。
あんまり無責任なことは言えませんが、昔っからTrisでやってきたことだから高価で用途の限られているAMPDじゃなくてTrisでいいんじゃないかな。

(無題) 削除/引用
No.11245-2 - 2023/03/05 (日) 14:59:40 - おお
https://www.fishersci.ca/shop/products/ampd-0-2m-buffer-soln-ph-9-5/p-7041980

サーモフィッシャーが売ってそうだけど。

TRAP/ALP二重染色の緩衝液 削除/引用
No.11245-1 - 2023/03/05 (日) 02:33:35 - ルリ子
TRAP染色とALP染色の二重染色が出来るキットを購入しましたが、プロトコールに
0.1mol/L AMPD-HCL buffer (pH9.4) に10分浸漬する過程が入っています。
TRAP染色の後に切片を中和するのが目的だと思いますが、このようなバッファーを持っていないので、困っています。
緩衝液は全て出来合の物を購入しており、このような強アルカリのバッファーはありませんでした。
この一工程のためだけに一式購入して自作しなければならないのでしょうか・・・。
何か他の緩衝液で代用できないものでしょうか。
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