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(無題) 削除/引用 No.11231-5 - 2023/02/24 (金) 15:01:19 - toto ATGはつけてもつけなくてもいいです。それよりもmCherryと目的蛋白の間にリンカーを入れるか、入れるなら長さをどうするか、あとはinclusionにならないような工夫を配列の段階からやるか、でしょうか。

(無題) 削除/引用 No.11231-4 - 2023/02/24 (金) 13:14:33 - おお あ、ごめんなさいコザックは大腸菌なので関係ないですね。関係あるのはSDでした。SDはあんまり意識してコンストラクト組んだ事がないですね、、、

(無題) 削除/引用 No.11231-3 - 2023/02/24 (金) 12:22:03 - EDDCC pETを購入したので、Hisタグの後にMCSです。 メチオニンは、タンパク質の途中にもありますよね。それに関しても、kozakを調べる必要があるんですね。

(無題) 削除/引用 No.11231-2 - 2023/02/24 (金) 11:58:38 - おお ATGは慎重にするならコザック様配列ができてないか確認して、似た配列になっていそうならLinkerを入れるとかATGを潰すとかするといいでしょう。 タンパクのN、C末はガッツリ構造を取っているのはあまり見たことがないので、私はリンカーをわざわざつなげることはあまりしません。ただし制限酵素認識配列を入れたいときはそれがリンカー的なものに結果的になっていることはあるかと思います。mCherryのあとはマルチクローニングサイト担ってたりしませんか？それならおそらく制限酵素認識配列の部分はmCherryから更に付け加えたものになっているので、リンカーみたいなもんです。 先行の研究とかでジャンクションの配列でどうなるか調べられてないときはどう転ぶかはあまり予想ができないのも事実といえばそうです。

組み換えタンパク質作成用のプラスミド 削除/引用 No.11231-1 - 2023/02/24 (金) 09:50:44 - EDDCC 大腸菌にHistag-mCherry-目的タンパク質のコンストラクトを導入し、タンパク質を回収したいと考えています。 3つのコンポネントの接続部分の配列をどうしたらいいのか、調べても確証が持てないのですが、何か基本的なルールや、定型的な配列はありますでしょうか。 また、mCherryも目的タンパク質もATGから始めて問題ないでしょうか。メチオニンを省略している方もいます。

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