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(無題) 削除/引用 No.11178-8 - 2023/02/09 (木) 02:08:35 - おお ベクタービルダー GeneArt Azenta IDT - Integrated DNA Technologies タカラバイオ株式会社 とか検索では引っかかりますね。 ベクタービルダーとかはそれなりに速いかな。たまにプラスミド増えにくいとか言う話を聞くけど。あとは注文したことないので速さとかわからないですけど、他に選ぶとしたらIDTかな。あとは大昔に、Nが１０個ぐらい並ぶプラスミドライブラリーを作ってくれって東洋紡に頼んだことがある。カタログにカスタムでプラスミド作りますと書いてなくてもこういうデザインのプラスミドがほしいといえば作ってくれる会社はあると思います。

(無題) 削除/引用 No.11178-7 - 2023/02/08 (水) 17:17:31 - - ダナフォームから何度か購入しました。

(無題) 削除/引用 No.11178-6 - 2023/02/08 (水) 16:44:47 - Procrastinator そろそろトピ主さんの追加情報を待った方が良いのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.11178-5 - 2023/02/08 (水) 15:31:11 - おお ゲノムでイントロンを含んだ状態で、10キロぐらいで有ればPCRできる時代ですから、cDNAが難しいなら、そっちで増やすって言うのもありだと思う。ゲノムのはいれつでも、プロモーター繋げると転写され、スプライシングまでやってくれる。それでもcDNAにこだわるなら、そのゲノムから発現する転写産物から改めてとると言うても取れる。

(無題) 削除/引用 No.11178-4 - 2023/02/08 (水) 15:11:05 - G25 > マウスのある遺伝子をクローニングしたいのですが、上司の指導のもと、試行錯誤をしてもうまくいかなかったため、いっそ購入しようとなりました。ただ、addgeneを捜しても発現ベクターは売られていませんでした。 もし最初から発現ベクターでクローニングしようとしていたのなら、それがうまく行かなかった理由かもしれない。クローニングに関してなら一般的にただのクローニングベクターのほうが効率がいい。発現ベクターだと一般にサイズが大きいので形質転換効率が低めであるし、leaky expressionがもたらす毒性によってコロニーが生えてこないというのがありがち。 インサートはRT-PCRかなんかで準備したのかな？　まず最初はただのクローニングベクターでとにかくクローニングしてしまうのが良いと思う。そしてあとからベクターの載せ替えをする。そのときにはleaky expressionを抑えるように配慮する。 一旦クローニングベクターでクローニングできたのに、発現ベクターに載せ替えるのができないならそういうことだし、 クローニングベクターにすらクローニングできないなら、クローニングの手技の問題をうかがわせる。

(無題) 削除/引用 No.11178-3 - 2023/02/08 (水) 13:25:23 - G25 遺伝子のクローニングとはゲノム上の遺伝子？　それとも実はcDNA? cDNAだとしたら二昔前くらいならI.M.A.G.E Consortiumのコレクションくらいしかなくて、直接、あるいはt特約の試薬会社や商社を通して入手していましたが、 今は、公的機関、私企業からさまざまなコレクションが提供されていて、検索すれば数多引っかかってきますね。 ナショナルバイオリソースプレジェクトも肝いりの理研のバンクなんてどうですか。 https://dna.brc.riken.jp/ja/clonesetja?doing_wp_cron=1675829407.5996921062469482421875

(無題) 削除/引用 No.11178-2 - 2023/02/07 (火) 21:43:56 - noname 日本国内なら、ファスマックが人工合成を特急料金で4営業日(〜1500pb)でやってくれますね。

プラスミドの購入について 削除/引用 No.11178-1 - 2023/02/07 (火) 21:23:54 - clone 勉強させていただいております。 マウスのある遺伝子をクローニングしたいのですが、上司の指導のもと、試行錯誤をしてもうまくいかなかったため、いっそ購入しようとなりました。ただ、addgeneを捜しても発現ベクターは売られていませんでした。 そこで皆様ならどこから発現プラスミドもしくはpUC19などに入った遺伝子クローンを購入されますでしょうか？安価で納入に時間が掛からないところがありがたいです。 GenscriptやOrigeneは時間がかかりそうです。 コメントをいただけましたら幸いです。 よろしくお願いいたします。

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