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(無題) 削除/引用 No.11138-6 - 2023/01/26 (木) 09:09:34 - PD Sudan black Bで脳の自家傾向を抑えるやり方があったと思います。泡については脱気してみるとか？

(無題) 削除/引用 No.11138-5 - 2023/01/25 (水) 16:49:09 - あの それから、脳の場合には、50マイクロメーターぐらいの厚切りにして フローティング法で染色してから、スライドグラスに貼り付けて、 蛍光染色用の封入剤で封入して、共焦点顕微鏡観察するのが一般的だと思います。 他の臓器とは違う点です。

(無題) 削除/引用 No.11138-4 - 2023/01/25 (水) 16:44:48 - あの 当方はマウス脳での経験はありませんので、詳細は既報を参照してください。 ただ、アルデヒドと脳に残存した物資が広範囲の波長の自家蛍光を出しているはずです。 そのため 蛍光標識した抗体を使っていない切片を蛍光顕微鏡や共焦点顕微鏡などで観察して、 消光が確実にされている状態でないと、間違った結論に到達します。

返信ありがとうございます。 削除/引用 No.11138-3 - 2023/01/25 (水) 15:16:43 - マウス ご返信いただき、ありがとうございます。 プロトコルとしては、マウスを頸椎脱臼した後脳取り出し(灌流固定しない)し、PFA中で1晩振って固定します。固定した脳からビブラトームで脳切片を作成します。この時パラフィン包埋や凍結切片にはせず、そのままスライスしています。 取得した切片を免疫蛍光染色し封入します。言及されているようなクエンチングについては行っていないので、お話聞かせていただけると大変うれしいです。

(無題) 削除/引用 No.11138-2 - 2023/01/25 (水) 09:04:26 - あの 実施してるプロトコルを、もう少し明記してください。 マウス脳での経験はありませんが、もし還流固定でないなら、 蛍光染色ならクエンチングの検討が必要です。 泡については過去スレにあった様な、微かな記憶があります。

マウス脳切片の封入方法 削除/引用 No.11138-1 - 2023/01/24 (火) 21:36:55 - マウス 固定したマウス脳切片を免疫染色した後に封入する際、濡れた状態だと切片が動いたりしわが入るのである程度乾かしてから封入しています。しかし、乾かすとバックグラウンドノイズが上がるのと微細な泡が入る場合があり困っています。同じような実験をしている方がいれば、どのように封入されているか教えていただきたいです。

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