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(無題) 削除/引用 No.11132-6 - 2023/01/24 (火) 12:22:28 - asan 多重感染が可能かどうかといえば普通にできますし、やってる人もいます。 ただ、ウイルス作成はそれぞれパッケージングしてウイルス液を混ぜるようなやり方でやった方がいいです。

(無題) 削除/引用 No.11132-5 - 2023/01/24 (火) 01:32:09 - 二重橋 皆様、ありがとうございます。レンチ2種の同時感染はトライする価値がありそうですね。両者のウイルス添加量を何パターンか振って感染させてみようと思います。抗生物質も片方でセレクションかけた後でもう一方のセレクションをかけるのか、同時に添加するのかでとれてくるクローンに違いが出たりするかもしれませんね。

(無題) 削除/引用 No.11132-4 - 2023/01/22 (日) 16:42:43 - 独り言 普通にできます。 ただ、片方の遺伝子が高発現だと、もう片方があまり発現してない株が多いかもしれません。（おそらくウイルスがゲノムにインテグレートされやすい場所が競合したり、ウイルスベクターのプロモーターが競合するから。） なので、両方とも高発現が必要であれば、ある程度の数をクローニングしないといけない。

(無題) 削除/引用 No.11132-3 - 2023/01/22 (日) 09:45:34 - toto iPSを作るときは、普通、そうやりますよね。レンチでも。昔、レトロですがそうやって山中ファクターを一度にいれて作ったことがあります。

(無題) 削除/引用 No.11132-2 - 2023/01/22 (日) 07:35:02 - おお ライブラリーを使うときに2種類以上の感染が起こらないようにMOIを0.5ぐらいにする事もあるので、2種類の重感染は起こるのは普通にあるものだと言える。ただ、経験はないのでちょっと書くのを控えてましたが、、、文献で例をさがすと、 doi:10.1155/2011/252387 Viral Infection. Lentiviruses infection was performed 24 hours after plating; liver cells were washed with PBS and infected with a 1 : 1 mixture of the two viruses at multiplicity of infection (MOI) 3 : 1 in growth media containing 8 ng/mL polybrene overnight. とあり、異なった抗生物質でセレクトしているか分かりませんが、2種類を同時に感染している。 しかしこちらでは、 doi.org/10.1073/pnas.0905931106 Because of the relatively low frequency of double infection of ERG and AKT using 2 lentiviral vectors, we prepared a bicistronic construct that contained both AKT- and ERG-coding sequences (Fig. S3). セレクションの仕方は確認してません。 とあり、系によってはやりにくいのかもしれません。

2種のレンチを同時感染させて安定発現細胞はとれる？ 削除/引用 No.11132-1 - 2023/01/22 (日) 00:31:57 - 二重橋 ふたつのコンストラクトを安定発現した細胞株を取りたいと考えています。ベクターとしてレンチウイルスを使う予定で、それぞれのコンストラクトには異なる薬剤耐性遺伝子がコードされています。感染させたい細胞株を用いて殺細胞濃度は決定済みです。ひとつのコンストラクトを発現させたい場合はレンチをかけて薬剤選択をしたあとクローニングし目的の遺伝子発現レベルを確認するという流れだと思いますが、細胞の継代回数がその後の実験（分化など）に影響を及ぼすため、2つめのコンストラクトを導入してクローニングした頃には分化能が損なわれるのではと懸念しています。そのため、2種類のレンチを同時にかけて、一定期間後に2薬剤で処理して生き残った細胞をクローニングするほうがいい？と思いはじめました。 このように、2種類のレンチを同時に感染させ2種類の薬剤でセレクションをかける方法でも目的とした細胞はとれるものでしょうか？

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