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AngIIの生理活性(Raw264.7細胞の刺激) トピック削除
No.11106-TOPIC - 2023/01/12 (木) 10:22:20 - macro
Raw264.7細胞にAngiotensin IIを処理するとサイトカインが産生されるという論文をもとに、論文の再現実験を行っていますが上手くいきません。
以下の検討を行いましたが改善が得られなかったので、
Angiotensin IIの生理活性を疑っています。

・播種細胞数(1E+04 〜 1E+06cells/mL)
・Angiotensin IIの刺激濃度(0.1 〜 100μM)
・刺激時間(6hr 〜 48hr)
・使用プレート(接着、非接着)
・培地(DMEM、RPMI)

Angiotensin IIは現在Sigma社のもの(#A9525)を使用していますが、
同メーカーのもので生理活性にロット差がある、
もしくは他のメーカー品を使用して問題なく生理活性が見られている(※)、
といったご経験がある方いらっしゃいましたらご教示いただけますと幸いです。

※別の細胞に対して刺激している場合でも大丈夫です
 
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(無題) 削除/引用
No.11106-5 - 2023/01/13 (金) 13:18:48 - macro
所持しているロットのCoAも確認してみましたが、
溶解性や純度の情報しかなく・・・
仰る通り比活性の情報があればよかったのですが。

(無題) 削除/引用
No.11106-4 - 2023/01/13 (金) 02:57:12 - おお
シグマの製品のページからロットごとの品質についての情報が見れると思いますが、、、こちらにはロット番号がないのでどんな情報があるのかわかりませんけど、、、

Unit(活性ユニット)が示されているような商品があればいいのかもしれませんね。

(無題) 削除/引用
No.11106-3 - 2023/01/12 (木) 17:02:00 - macro
情報ありがとうございます。

やはりそうなんですね。

他メーカー品の使用やストック溶液に注意して引き続き検討してみます。

ありがとうございました!

(無題) 削除/引用
No.11106-2 - 2023/01/12 (木) 12:12:09 - tts
私もAngIIを使用した経験ありますが、タンパク製品ですのでクオリティ次第でどうしても生理活性にばらつきが出やすい印象です。

できるだけクオリティの良いものを使うことをおすすめします。

AngIIのハンドリングで注意が必要なのが、安定性が低くすぐに分解するという点です。
ストックの作成時に酸性条件で保管すると多少安定です。
リサーチゲートでストック作成の溶解に関するスレッドがあったので良かったら参考にして下さい。
https://www.researchgate.net/post/What-the-best-way-to-solubilize-angiotensin-II-to-make-stock-solution

AngIIの生理活性(Raw264.7細胞の刺激) 削除/引用
No.11106-1 - 2023/01/12 (木) 10:22:20 - macro
Raw264.7細胞にAngiotensin IIを処理するとサイトカインが産生されるという論文をもとに、論文の再現実験を行っていますが上手くいきません。
以下の検討を行いましたが改善が得られなかったので、
Angiotensin IIの生理活性を疑っています。

・播種細胞数(1E+04 〜 1E+06cells/mL)
・Angiotensin IIの刺激濃度(0.1 〜 100μM)
・刺激時間(6hr 〜 48hr)
・使用プレート(接着、非接着)
・培地(DMEM、RPMI)

Angiotensin IIは現在Sigma社のもの(#A9525)を使用していますが、
同メーカーのもので生理活性にロット差がある、
もしくは他のメーカー品を使用して問題なく生理活性が見られている(※)、
といったご経験がある方いらっしゃいましたらご教示いただけますと幸いです。

※別の細胞に対して刺激している場合でも大丈夫です

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