全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.11099-3 - 2023/01/12 (木) 11:08:48 - 蕪 おおさん お返事ありがとうございます。タイターが高すぎるようで添加量を下げたら死ななくなりました。ある程度コンフルエンシーがないと増えない細胞のようで、継代しながら薬剤セレクションをしてみたところ、無事選択がかかって遺伝子導入細胞はできているようです。しばらくスプリットを続けて増殖能をもつものを集めようと思います。

(無題) 削除/引用 No.11099-2 - 2023/01/08 (日) 19:41:26 - おお 毒性がそんなに出るのも不思議だけど。 感染終了時に1：3~5とかで継代してしまえばいいのでは？

ヒトprimary株化 削除/引用 No.11099-1 - 2023/01/07 (土) 08:15:00 - 蕪 ヒト初代由来線維芽細胞を入手し各種実験に使う目的で不死化させようとしています。薬剤耐性遺伝子の載ったhTERTプラスミドをレンチウイルスにパッキングし、70%confluent程度の初代細胞（Passage6-7）にレンチをかけて4日後から薬剤セレクションをかけています。気になっているのはセレクションを始める時点で細胞が100%コンフルエントに達してしまっていることです。セレクションをかけるまでに100%に達しないほうがよい、など初代細胞を不死化させる際に気をつけるべき点があるか、あるいは細胞不死化のプロセスでは100%コンフルになっても構わないものなのかお伺いしたくトピックをたてました。 いまのところ、予備検討で ◎レンチ感染には3-4日かかり、早い段階（例えばレンチをかけた翌日）から薬剤セレクションをかけると細胞が死んでしまうこと ◎低い細胞密度でウイルスをかけると細胞が死んでしまうこと までは確認しました。お答えいただくのに情報が不足していればご指摘いただけるとありがたいです。どうぞよろしくおねがいします。

全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---