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マウス癌細胞株と抗癌剤を使用したin vitro実 トピック削除
No.11081-TOPIC - 2022/12/29 (木) 16:26:53 - みじょるの
マウス細胞株と抗癌剤を使用したin vitro実験考えています。

大まかな内容としましては、
@マウスの癌細胞株を10cm dishで培養させる。
A抗癌剤を投与する。
B蛋白質を抽出しWBで発現を見る。
といった形です。

具体的なプロトコールなどご存知な方がいらっしゃったら教えていただきたいです。
(例えば、培養後●日目に培地を吸引後に、抗癌剤と培地●ccをまいて、さらに●日培養後にタンパク質を抽出するなど)

抗癌剤はいくつか濃度を作り、濃度別にタンパク質の発現の変化をみようと思っています。

よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.11081-3 - 2022/12/29 (木) 23:09:08 - 11
差し支えない範囲で以下は必要と思われます。たぶんこの種の実験には経験豊富な方が多いと思うので、たぶん誰か適切な実験方法を考えてくれるかもしれません。先生に聞いて指示を受けるのも一つのやり方とは思いますが、院生あるいは一定の研究経験のある方ならばまずは自分で何通りかの方法を考えて実際試してみて、何がまずいか、どう改良すれば良いかなど学びながら実験した方が将来的には良いと思います。大げさかもしれませんが、科学の歴史上その実験をするのはあなたが最初なわけですし。
生命科学では広く、通用する万能なプロトコルのようなものはかなり限定され、大部分は既存のプロトコルを自分自身の研究目的に応じて自分の実験系に合うように適宜改変することが必要な場面の方が(とりわけタンパク質関係は特に)多く、時には鬱陶しい予備検討も必要になります。またこれができるのは当事者ご本人しかいません。平素からそういうことを日常的に何度となく経験している人は、自分の系でうまくいったから、これそのままあなたの系にも使えますよ、とかは人様に対して自信持ってなかなか言えません。

1. 当該細胞のおおよその倍加時間。
2.WBで何の変化を見たいのでしょうか。タンパク質の発現?リン酸化などの修飾?
3.使用する抗がん剤の作用点もしくは機序。
4,cytotoxic or cytostatic?
5.当該抗がん剤もしくはそれと類似の化合物を用いたin vitro実験について過去の文献は精査しても情報が得られないということでしょうか。新規化合物などの理由で 関連文献等の情報に乏しく何からどう手をつけて良いかわからないということでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.11081-2 - 2022/12/29 (木) 21:26:15 - おお
実験デザインは、研究の目的を把握しているあなたを指導している人と相談して決めてください。初期応答が見たいのかとか、毒性が現れない濃度で細胞の耐性に寄与するものを見るのか、細胞死に至るまでの細胞内のシグナルやカスケードが見たいのか?などなど見たいものによって実験デザインは違います。

10cmの dish には大体7から10ml の培地を使います。この量についてもラボの流儀があるかも知れません。薬剤を入れるのは撒いた翌日に行うのが標準的だと思います。

マウス癌細胞株と抗癌剤を使用したin vitro実 削除/引用
No.11081-1 - 2022/12/29 (木) 16:26:53 - みじょるの
マウス細胞株と抗癌剤を使用したin vitro実験考えています。

大まかな内容としましては、
@マウスの癌細胞株を10cm dishで培養させる。
A抗癌剤を投与する。
B蛋白質を抽出しWBで発現を見る。
といった形です。

具体的なプロトコールなどご存知な方がいらっしゃったら教えていただきたいです。
(例えば、培養後●日目に培地を吸引後に、抗癌剤と培地●ccをまいて、さらに●日培養後にタンパク質を抽出するなど)

抗癌剤はいくつか濃度を作り、濃度別にタンパク質の発現の変化をみようと思っています。

よろしくお願いいたします。

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