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DNAラダーマーカーの配列 トピック削除
No.11025-TOPIC - 2022/12/10 (土) 04:30:33 - おお
1kbpや100bpのDNAラダーマーカーについてですけど、どなたかその配列に興味があって調べてみたり、偶然配列を見つけたりして知っているとかいう方いらっしゃいませんでしょうか?

メーカーによって違うかもしれませんけど、知っている範囲での話で構いません。なにかマーカーに好まれて使われる配列とかあるんでしょうか。それとか特別な塩基を使ってたりとか、特定のベースを使わないとか、、、

ちょっといじってみようかなぁなんて思ってるのです。
 
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(無題) 削除/引用
No.11025-3 - 2023/01/03 (火) 04:54:43 - おお
お返事が遅くなりました。昔のDNAのマーカーはlambda phage DNAを制限酵素(lambda Hind IIIとか)で切ったものがよく使われていたと思います。 pPSUに関してはなるべく等間隔スケールになるように改善したもののようです。lambda Hind IIIは長い方はシグナルが強く、短い方はシグナルが弱くなるため、使いづらいとまでは言いませんが少し染色の状況が悪いと500bpあたりが見にくくなったりもします。同様にプラスミドを切る場合でもシグナルは長さ依存なのでちょっと気になるところです。

NEBのサイトについてですが、私も確認しました。既存のDNA配列を使ってマーカーにしているようですね。他社もおそらくそういうことでしょう。

参考になります。

(無題) 削除/引用
No.11025-2 - 2022/12/10 (土) 19:34:39 - マーカー
面白そうだなと思い調べてみるとこんな論文を見つけました。

The pPSU Plasmids for Generating DNA Molecular Weight Markers
Scientific Reports | 7: 2438 | DOI:10.1038/s41598-017-02693-1 1

この論文ではパテントなどを侵害しない配列としてlambda phage DNAをベースに使ったと書いています。ちなみにだいぶ安く自作できるので、このプラスミド2種類(100bp and 1kb DNA ladder用)リクエストしたくなりました。

また、NEBのサイトで
FAQ: Why are the DNA ladders showing up on my Southern blot? What is the sequence or composition of the ladder bands?

The bands consist entirely of DNA derived from either pUC or Adenovirus 2 DNA, which is used as filler DNA to generate plasmids of the right size for the markers. (回答の一部引用)
とあり、 pUC or Adenovirus 2 DNAの由来の配列を使っているようです。

DNAラダーマーカーの配列 削除/引用
No.11025-1 - 2022/12/10 (土) 04:30:33 - おお
1kbpや100bpのDNAラダーマーカーについてですけど、どなたかその配列に興味があって調べてみたり、偶然配列を見つけたりして知っているとかいう方いらっしゃいませんでしょうか?

メーカーによって違うかもしれませんけど、知っている範囲での話で構いません。なにかマーカーに好まれて使われる配列とかあるんでしょうか。それとか特別な塩基を使ってたりとか、特定のベースを使わないとか、、、

ちょっといじってみようかなぁなんて思ってるのです。

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