Bio Technical フォーラム

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ELISAに用いる試料 トピック削除
No.11010-TOPIC - 2022/12/03 (土) 15:27:37 - hogehoge
購入を考えているELISA kitのdatasheetに、測定試料は培養上清, 血漿, 血清のみ記されています。この場合、細胞ライセートは何が何でも使えないでしょうか。

サンプル間のタンパク発現比が見たいのですが、Westernでcan get signalを用いても検出できず、免疫染色も上手くいかなかったので、より感度の高い手法を試したいと思っており、現在ELISAを考えています。
PCRでもポジコン(強制発現細胞株)ほど発現は高くなく、ゆえにサンプルはいずれも検出限界を下回っているのではと考えています。

そこで、ELISA kitを探しているのですが、data sheetに細胞ライセートの記述のある商品が見つかりません。

良い知恵をお借りしたいです。
よろしくおねがいします。
　
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(無題) 削除/引用
No.11010-2 - 2022/12/03 (土) 16:57:05 - おお
ELISAで使っている抗体と、ライセートに使っているデタージェント相性次第なんじゃないかな。あるいは、ライセートのバッファーをくふうするか。
ただし、使用経験のない状態のサンプルでバックグラウンドや検出感度が変動する可能性もある。

個人的には細胞からライセートを得るときのフラクショネーションやエンリッチメントなどを工夫するとかをまずは勧めるが。また、キットで抗体の特性が分からないものより、IPできる抗体を探してIP-WBの方が最適な条件を見つけれそうだと思うが。

ELISAに用いる試料 削除/引用
No.11010-1 - 2022/12/03 (土) 15:27:37 - hogehoge
購入を考えているELISA kitのdatasheetに、測定試料は培養上清, 血漿, 血清のみ記されています。この場合、細胞ライセートは何が何でも使えないでしょうか。

サンプル間のタンパク発現比が見たいのですが、Westernでcan get signalを用いても検出できず、免疫染色も上手くいかなかったので、より感度の高い手法を試したいと思っており、現在ELISAを考えています。
PCRでもポジコン(強制発現細胞株)ほど発現は高くなく、ゆえにサンプルはいずれも検出限界を下回っているのではと考えています。

そこで、ELISA kitを探しているのですが、data sheetに細胞ライセートの記述のある商品が見つかりません。

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