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(無題) 削除/引用 No.11004-3 - 2022/12/07 (水) 08:57:57 - S ありがとうございます。 パラフィン浸透の条件検討でブロック作成したところ、 いままでの浸透時間では短いようでした。 何度か試してみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.11004-2 - 2022/12/02 (金) 12:44:21 - ぴ マウスの骨のパラフィンブロック作成をよく行なっていますが、私が行っているプロトコルでは、もっとEDTA脱灰が長いです。また、経験からパラフィンの種類によっては硬組織への浸透が悪いものも存在すると感じております。薄切用の刃と刃のホルダーも硬組織用のものがありますので、そちらを使ってみるのも良いかもしれません。

マウス大腿骨のパラフィン薄切について 削除/引用 No.11004-1 - 2022/12/01 (木) 12:44:30 - S マウスの大腿骨のパラフィンブロックを作成し、 薄切をしているのですがなかなか上手く切ることができずにいます。 伸展中に骨髄と骨が剝離したり、 薄切中も骨髄がぼろぼろになってしまったりします。 薄切のコツ、ブロック作成手順でアドバイスいただきたいです。 固定：10％中性緩衝ホルマリンor4％PFA　＠4℃ O/N 脱灰：10％EDTA(inPBS) ＠RT O/N~3days (端を針で刺して確認) PBS　Wash 70％ EtOH 2h~ 80% EtOH 2h~ 95% EtOH 2h~ 100% EtOH 1h 100% EtOH 1h 100% EtOH 1h キシレン　1h キシレン　1h キシレン　1h パラフィン浸透（軟パラ)　真空装置なし ※適正な時間が分からないのでいつも適当になってしまっていますO/N程度 硬パラ包埋 ユング型のミクロトーム45°逃げ角で厚4um 室温が高めの部屋(設定変えることが難しい)で、 保冷剤を用いてブロックを冷やしながら薄切しています。 パラフィン浸透のエンドポイントがイマイチ分かっていないのも問題かと思いますが、 何卒アドバイスいただけたら幸いです。 よろしくお願いします。

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