全14件 ( 1 〜 14 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.10984-15 - 2022/11/30 (水) 13:15:01 - ema 方向性が違うけれど、「増殖曲線を書きたい」だけなら、セルカウントではなく顕微鏡画像でのタイムコースはだめなのでしょうか。 https://www.sartorius.com/en/products-jp/cell-analysis-jp/incucyte-live-cell-analysis-system-jp 共用機器として貸してくれる大学共用施設もあります。

(無題) 削除/引用 No.10984-14 - 2022/11/28 (月) 12:11:42 - 5 24well でT/E0.5ml +Medium0.5ml=1mlの細胞懸濁液だと細胞濃度低すぎてカウントが（少なくとも計算板では）困難ではないかという気がするのですが問題なくカウントできますか。

(無題) 削除/引用 No.10984-13 - 2022/11/28 (月) 11:13:54 - qq >トリプシンは500マイクロリットルで3分37℃反応させ、 >そこに同量の培地を入れてピペッティングで回収しています この操作が怪しい感じです。 12-wellか24wellか判りませんが、500ulは多すぎるのではないでしょうか？ 反応時間を3分37度に固定するのではなく、細胞の離れ具合を確認して「はがれかけたところ」でピペッティングして、トリプシンと同量か二倍量の培地で素早く懸濁するのが良いかと思います。 が、この辺りは使用する細胞の種類にも依りますし、ネットで説明するのは難しいかなと思います。

(無題) 削除/引用 No.10984-11 - 2022/11/28 (月) 08:42:53 - せる トリプシン処理に関して追加です 剥がれていない気がすると言うのは厳密には誤りで、 処理して得られた細胞懸濁液中の細胞が播種時より少なかったりすること、顕微鏡観察すると細胞が残っている事から、回収がうまく行っていないと考えました ピペッティングは実施していますが、ゆすったり叩いたりすると培地が溢れるのが少々怖いです トリプシンは500マイクロリットルで3分37℃反応させ、そこに同量の培地を入れてピペッティングで回収しています

(無題) 削除/引用 No.10984-10 - 2022/11/25 (金) 19:01:10 - ２１３ウェr クリンベンチ使う１時間くらいチューブを袋ごとベンチの中に入れてUV当てておけばいい。で終わったら外に出しておく。ベンチ内に入れっぱなしでもチューブは劣化しない感じだけど、ベンチの中にいろんなもの入れられると、うちみたいにただでさえ広いとは言えない有効面積がさらに減らされて嫌です。

(無題) 削除/引用 No.10984-9 - 2022/11/25 (金) 16:41:16 - おお > �@に関してはトリプシン処理で綺麗に剥がれていない気がするのです 気がするのは別に気がしてもいいのだけど、実際に剥がれていれば問題は別のところにあることになりますから、ならばウェルのサイズで解決するか分からないですよね。だから、アドバイスとしてそれが適切なのか不安が残るので指摘しているわけです。 多分、ウェルが小さいために除いた後の培地量とのトリプシン量比が原因で剥がれにくいと言う感覚なのかも知れません。でもそれは工夫のしようがあります。 多めにトリプシンを加える。 一度PBSかトリプシン溶液で洗う。もしその時に一部剥がれているようなら、PBS(トリプシン溶液)は回収して、トリプシン処理後の懸濁液と混ぜてから測る。最初に洗うトリプシン溶液は回収の際にあらかじめ活性を中和しておけば、処理の行き過ぎは抑えられる。

(無題) 削除/引用 No.10984-8 - 2022/11/25 (金) 16:26:53 - 774 接着が強い細胞だとトリプシンだけでは剥がれにくく、物理的に、セルスクレーパーで掻き取ったり、ピペッティングして剥がすということもよく行います。

(無題) 削除/引用 No.10984-7 - 2022/11/25 (金) 15:24:56 - み >[Re:6] せるさんは書きました : > �@に関してはトリプシン処理で綺麗に剥がれていない気がするのです 多めのトリプシンでたまに揺すったりして剥がせば良いだけでしょう

(無題) 削除/引用 No.10984-6 - 2022/11/25 (金) 14:52:01 - せる �A は銀紙等使用してみます �@に関してはトリプシン処理で綺麗に剥がれていない気がするのです

(無題) 削除/引用 No.10984-5 - 2022/11/25 (金) 12:28:24 - おお �@ 皆さんの言うように６ウェルとか3.5cmディッシュはよく使われると思うけど、回収率が悪いと言うのが良くわからない。12ウェルプレートでやったことあるけど、べつに何ら問題はなかったし。どうして回収率が悪いと思ったのか？ �A 短期間をどれくらいと考えているかわからないけど、一週間ぐらいは大丈夫と思う。半年ほどでも少し痛んだかなと思う事はあれど、遠心して細胞を回収するには十分だったりも。気になるなら銀紙で覆うとかでも良いと思うし、もっと簡単にするなら銀紙で覆った下敷きみたいな物を上から被せるだけでも良いかもしれない。

(無題) 削除/引用 No.10984-4 - 2022/11/25 (金) 10:59:08 - 774 1. セルスクレーパーでうまく掻き取れず、回収できないということ? トリプシン等ではがすと問題があるんでしょうか。 プレートの形状だと作業しにくいなら6ウェルプレートと35mmディッシュは同じくらいの大きさです。 2. クリーンベンチはシャッターを閉め切っておけるなら、使用前後30分ずつ位UV点灯すれば問題ありません。この程度なら(UVランプ直下でない限り)2週間程入れていても大丈夫でした。 外袋ごと箱に入れるとか、アルミ箔で覆っておくとかすれば常時点灯でもいけるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.10984-3 - 2022/11/25 (金) 10:54:16 - qq �A　強度的には大丈夫かもしれませんが、UV照射でラジカルを生じないか不安です。（当方、その辺りの知識はありません。）チューブの袋をアルミフォイルで覆っておくとかするのはどうなんでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.10984-2 - 2022/11/25 (金) 08:40:08 - み �@6 well plateあたりが扱いやすい 細胞数をカウントしているのでしょうか。WST assayなど回収しなくても細胞数見積る代替法にするとか。 �AUVでチップなんかはボロボロになってくる危険性はあるけど、１週間とか短期間なら耐えられると思う。遠沈管はチップの材質より強そうかな。

細胞増殖曲線のこととクリーンベンチのこと 削除/引用 No.10984-1 - 2022/11/24 (木) 21:08:44 - せる こんばんは �@ 細胞の増殖曲線を書きたいのですが、12wellや24wellで培養した細胞を回収しようとすると、どうにも回収率が悪く困っています 何か良い手はないでしょうか？ 10cmシャーレなどでやるしか無いですか？ �Aクリーンベンチ内に15mlチューブを外袋(透明)のまま放置しておいても短期間であれば劣化しないでしょうか？ クリーンベンチの周りがあまり綺麗では無いので毎回出し入れしたくなくて、、、

全14件 ( 1 〜 14 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---