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(無題) 削除/引用 No.10973-3 - 2022/11/21 (月) 03:09:20 - おお その前に、どの程度発現してるの？非常によく発現しているなら、既に示されている様な終了はあるでしょうけど。 あと 理想的単純計算で、5mg以上の抗体がないとそれぐらいの量は期待できない。こっちの相場でそれくらいの量買うなら20万弱だし。 強いて抗体つかうなら、ある程度の量のflag抗体ビーズをカラムにたててクロマトにして、ペプチドで溶出する方がいいようなきがする。それ以外にも方法は無いことはないけど。 飽和して素通りするぐらい、流せば効率的だろうし素通りしたやつは、保存して置いて溶出後、また乗せることもできるだろう。 どんな状態のタンパクを必要としているのか分からないけど、精製方法はそれいがにも選択肢はありますし。キレートカラムは確かにコストパフォーマンスはいいです。ただ、単独では粗精製程度の純度と思った方がいいと思う。

(無題) 削除/引用 No.10973-2 - 2022/11/21 (月) 00:57:53 - TK-1 3xFLAGでeluteすれば後退を共有結合させていればビーズはいくらでも再生できそうな気もするし、そもそもどれくらいの細胞数を使っているかにもよる。 結論としては10-20mgくらいを浮遊系の293Tで過剰発現すれば一週間くらいで終わりそうな気がしますが。

FLAGによる免疫沈降で蛋白どれくらいとれるか 削除/引用 No.10973-1 - 2022/11/20 (日) 22:38:39 - sample あるタンパクの抗体を作成する目的に5�r以上の蛋白が必要です。 FLAG融合のリコンビナントタンパク質を哺乳類細胞で発現させていますが、 免疫沈降でタンパク質を溶出しても、数回で合計数十ugしか取れません。 このままでは5�rタンパク質を得るには抗体だけで100万超える可能性があります。 FLAGによる免疫沈降で5�r以上の蛋白を回収できた経験ありますか。 また5�rのタンパクを得るには他のタグによる金属キレートカラムを用いたタンパク質精製の方が現実的でしょうか。

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