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バクテリアを培養細胞から除去したい トピック削除
No.10870-TOPIC - 2022/10/13 (木) 19:50:53 - kg
培養細胞がコンタミしました。
非常に貴重なのでバクテリアをなんとか除去したいと考えています。
方法はありますでしょうか?
 
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No.10870-4 - 2022/10/14 (金) 11:40:03 - 774
除菌作業しても本当に除けたか分からない
保存タンクが液相なら他のサンプルを汚染する可能性がある
除菌できたとして、感染による変質が起きている可能性がある(後々再現性が取れなくなる)

上のような理由で、貴重だろうと長期的にはあきらめてやり直す方が良い。

(無題) 削除/引用
No.10870-3 - 2022/10/14 (金) 00:49:30 - gふ
普段使ってる抗生剤とは違う抗生剤を使ってみる。もしバクテリアが減ったら、当面はその抗生剤入りの培地を使い、2日に1回くらい培地交換して10日くらい培養する。
次に限界希釈法でシングルセルになるまで希釈する、増殖してきたらスケールアップ。この間も継続して抗生剤は入れておく。

(無題) 削除/引用
No.10870-2 - 2022/10/13 (木) 21:24:29 - qq
1)あきらめる。コンタミしたくなければ、これからは培地に抗生物質を入れないで培養する。
嫌なのでしょうね。

2)10x抗生物質(anti-bitic mycotic mixのようなやつ)で1時間処置して、PBSでよく洗う。
3)5箇所くらい別々の場所からピペットマンに短いチップで細胞を5ul程度こそげ取る。
3)6well-plateに20ul程度のトリプシン溶液をウェルの真ん中に入れておいて、こそげ取った細胞を分散する。
4)細胞が分散できたなら、普通の培地を2ml添加し懸濁後、1x抗生物質で培養する。
5)運良く除菌できていれば、抗生物質を入れないで培養して、除菌を確認する。
6)コンタミしたくなければ、これからは培地に抗生物質を入れないで培養する。(これが一番大切)

一度だけ、遺伝子導入した細胞をこの方法でレスキューしたことがあります。

バクテリアを培養細胞から除去したい 削除/引用
No.10870-1 - 2022/10/13 (木) 19:50:53 - kg
培養細胞がコンタミしました。
非常に貴重なのでバクテリアをなんとか除去したいと考えています。
方法はありますでしょうか?

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