Bio Technical フォーラム

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アクチン繊維を見るための顕微鏡は? トピック削除
No.10860-TOPIC - 2022/10/12 (水) 00:11:23 - ミー
素人のような質問で、恐縮ですが、培養細胞でファロイジンでアクチン線維を染めています。

共焦点顕微鏡でトライしたのですが、逆にfiberが見えづらくなる気がしています。論文を見る限りでは、人によって共焦点を使う人もいれば、非共焦点顕微鏡を使う人もいるのですが、共焦点の解像度の高さは、逆に観察には不利な点になるのでしょうか。zスタックしたところで、線維の連続性が失われてしまう気がしています。

分野外でして質問させていただきます。
 
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(無題) 削除/引用
No.10860-3 - 2022/10/12 (水) 15:23:56 - toto
共焦点でpinholeサイズを光学的にベストな値にして理論的に必要枚数をZ軸スキャンすれば、再構築するとZ方向も適切な解像度で立体的に見えるような絵が撮れますよ。あるいはピンホールを大きくして焦点面近くの数枚の画像をmaxlimum intensity projectionする手もあります。
シンプルなwide fieldの蛍光顕微鏡で撮ると、細胞骨格ではぱっと見良い感じになりますが、Z方向の分解能はでません。

(無題) 削除/引用
No.10860-2 - 2022/10/12 (水) 02:59:40 - おお
>zスタックしたところで、線維の連続性が失われてしまう気がしています。

意味がわかりません。

アクチン繊維を見るための顕微鏡は? 削除/引用
No.10860-1 - 2022/10/12 (水) 00:11:23 - ミー
素人のような質問で、恐縮ですが、培養細胞でファロイジンでアクチン線維を染めています。

共焦点顕微鏡でトライしたのですが、逆にfiberが見えづらくなる気がしています。論文を見る限りでは、人によって共焦点を使う人もいれば、非共焦点顕微鏡を使う人もいるのですが、共焦点の解像度の高さは、逆に観察には不利な点になるのでしょうか。zスタックしたところで、線維の連続性が失われてしまう気がしています。

分野外でして質問させていただきます。

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