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(無題) 削除/引用 No.10858-11 - 2022/10/13 (木) 11:23:15 - おお kd あるいは KoされたESやiPS細胞を使いオーガノイドなど目的の組織の特徴を持つものに分化させてから使うとか。オーガノイドとか器官培養せずとも、目的の細胞に分化させたもので事足りならそれでもいい。

(無題) 削除/引用 No.10858-10 - 2022/10/13 (木) 09:31:59 - Keigo(M1) 皆様 たくさんのご意見ありがとうございます。 気になった内容に回答致します。 必ず全身性にノックアウトしたいというわけではなく、興味のある臓器/細胞でノックアウトされていれば良い、というのであればin vivoゲノム編集という手もあると思います。 上記のターゲットは、腸●●●←遺伝子名になります。 ただ、他の肝臓や脂肪や腎臓にも発現している遺伝子になります。 特定の臓器の遺伝子をノックアウトしたマウス(野生型を含めて)を用いて、サンプルを投与した実験(測定項目は、脂質濃度や血糖値等)を過去に研究室でおこなっています。ただ、使った費用を拝見したら100万は越していたので、何か代用可能な動物実験はないか調べていました。 動物実験で難しい場合、まずは細胞実験で、腸でターゲットにしている遺伝子のノックダウン実験系も検討しています。

(無題) 削除/引用 No.10858-9 - 2022/10/13 (木) 08:55:24 - AAA AAV使うのも悪くないのでは？

(無題) 削除/引用 No.10858-8 - 2022/10/12 (水) 11:16:38 - GLUT4 BINDS支援事業などを活用すれば、資金がなくてもKOマウスを作成していただけますよ。 https://www.binds.jp/

(無題) 削除/引用 No.10858-7 - 2022/10/12 (水) 10:48:49 - AA 必ず全身性にノックアウトしたいというわけではなく、興味のある臓器/細胞でノックアウトされていれば良い、というのであればin vivoゲノム編集という手もあると思います。 px551のようなベクターを使ってガイドRNA発現ウイルスを作成し、Cas9発現レンチウイルスと一緒にして野生型の任意の組織に注入するだけです。 ガイドRNAの選定さえしっかりしていれば、それなりの効率でKDできます。

(無題) 削除/引用 No.10858-6 - 2022/10/12 (水) 04:42:36 - おお レンチを使う系としてどんな実験系を考えているのかわかりませんが、たとえばESに感染してそこからTransgenicを作るとした場合、通常のDNA（プラスミド）を導入するのと違ってBSL2の設備が必要になり帰ってコストがかさみそうな気がするし、実際に片手間に検索したくらいではレンチを使ったトランスジェニックを受注リストのラインナップに入れているのは見つけられなかった。そういう意味でもCas9系のKDのほうがポピュラーで、通常のトランスジェニック作成と大きく値段が変わらないのだろうとおもう。 ESを自身で増やしてレンチで導入して、動物を作ってもらうとかだと割安になるだろうし、近くにノウハウを持っている人があれば教えてもらいながらでもESの株をつくることはできるのかもしれない。

(無題) 削除/引用 No.10858-5 - 2022/10/12 (水) 02:34:42 - mont 運が良ければ、以下のサイトからマウスかES細胞が購入できます。 ESならマウスを輸入するよりは安いのでは。 値段は知りませんので、ご自分で問い合わせてください。 https://www.mousephenotype.org/

(無題) 削除/引用 No.10858-4 - 2022/10/11 (火) 09:40:21 - G25 100万円くらいあればKO作成外注もできそうだけど。 CRISPR/Cas9のプロバイダも雨後の竹の子だし。 いくつかのプロバイダでみたら少なくとも基本料金の範囲なら100万で収まりそうに見えましたが、どうでしょう。 あとは必要なオプション、あるいは自前でやる作業でどれだけ負担がかかるか。

(無題) 削除/引用 No.10858-3 - 2022/10/10 (月) 19:40:42 - 独り言 レンチウイルスで動物のノックダウンはかなりつらいかと。KDされてない細胞が多くあると、フェノタイプの観察に苦戦するから、動物実験ならKOにしないと、後でドン詰まる。 CRISPRならマウスでも数十万円とかでKO作ってくれるところありませんか？例えば所属している大学のマウス施設とか。 マウス実験がそもそもコスト的に難しいのであれば、他の確立されているモデル生物ならどれでもよいのでは。 ハエとか線虫なら解析は早いですし、コストはマウスに比べたら断然お買い得。 ゼブラフィッシュなどの魚ならより高等で複雑な実験とかできるかも？目的によるが。 どちらにしても、共同研究して、教えてくれるラボが必要です。

(無題) 削除/引用 No.10858-2 - 2022/10/10 (月) 16:57:12 - おお USコアファシリティーのサービスとか見るとDNAを単に導入するようなTRANSGENICを作る場合大体６０００ドルぐらいですかね。業者に聞けばはやいと思いますが。

動物実験 削除/引用 No.10858-1 - 2022/10/10 (月) 16:26:39 - Keigo (M1) お世話になっております。 動物実験で特定の遺伝子をノックアウトする動物以外で、コストを抑えて行うことができる動物はありますでしょうか。 KOマウス自体高くて購入が出来ません。 レンチウイルスを導入して特定の遺伝子をノックダウンさせた変異動物とかで代用できるのではないかと考えています。 予算は最大で100万円程を想定しています。 どなたかご教授お願いします。

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