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ホールマウント免染時の封入について トピック削除
No.10827-TOPIC - 2022/09/29 (木) 12:11:39 - マウントレーニア
マウス蝸牛のホールマウント免染をしています。
免染後の封入のコツについて伺いたいです。

ターゲットは有毛細胞で、蝸牛のうずまきを3分割にして染色し、うずまきを上から見るような向きで封入しています。
うずまきの頂上〜中ほどは普通にカバーガラスをかけても十分観察できるのですが、
「うずまき管」という通り組織がカーブしているので、部位によってはカーブが強くカバーガラスでもつぶしきれずに、見たい細胞にうまくピントが合いません。

厚みを生むような部位は極力切除したり、封入後にカバーガラスごと動かして調整したりするのですが、あまり手技が安定しません。

厚みのあるサンプルの封入について、何かコツはあるでしょうか?

蝸牛はニッチかもしれませんが、似たようなご経験がある方がいらっしゃいましたらご意見いただけますと幸いです。
 
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No.10827-6 - 2022/10/02 (日) 13:23:59 - mont
ゲタの例です。やっぱり既製品は扱いが楽です。

https://www.sigmaaldrich.com/CA/en/substance/gracebiolabssecuresealimagingspacer1234598765

(無題) 削除/引用
No.10827-5 - 2022/09/30 (金) 10:34:37 - G25
ホールマウントでは当たり前のようにゲタ(スペーサー)をかませます。

ビニールテープ(適当な大きさにきってスライドグラスに貼り付けて、カッターでゲタを残してトリミングをする。必要に応じて重ねて厚みを出す)やアルミホイル、パラフィルムなど、みなさんそれぞれの工夫があるんじゃないでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.10827-4 - 2022/09/30 (金) 09:02:22 - マウントレーニア
>G25様
>AA様

観察は共焦点顕微鏡です。
標本作製時の手技にとらわれていたので、撮影時に工夫できるとのことでとても参考になります。
ありがとうございます。

今まで薄切切片を扱う事がほとんどだったので、「ゲタ」というのは初めて聞きました。
標本にある程度厚みをもたせるためには、よく使われるのでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.10827-3 - 2022/09/29 (木) 14:55:22 - AA
iSpacer,だったかいう名前のカバーガラス用のゲタも売っているのでそう言うのでうまく潰さずに観察するのはありだと思います。

(無題) 削除/引用
No.10827-2 - 2022/09/29 (木) 12:16:47 - G25
観察は透過光ですか落射蛍光ですか共焦点ですか。

共焦点ならむしろカバーグラスをゲタで浮かせてつぶさないようにして光学切片にしてみれば良いはずですね。

ホールマウント免染時の封入について 削除/引用
No.10827-1 - 2022/09/29 (木) 12:11:39 - マウントレーニア
マウス蝸牛のホールマウント免染をしています。
免染後の封入のコツについて伺いたいです。

ターゲットは有毛細胞で、蝸牛のうずまきを3分割にして染色し、うずまきを上から見るような向きで封入しています。
うずまきの頂上〜中ほどは普通にカバーガラスをかけても十分観察できるのですが、
「うずまき管」という通り組織がカーブしているので、部位によってはカーブが強くカバーガラスでもつぶしきれずに、見たい細胞にうまくピントが合いません。

厚みを生むような部位は極力切除したり、封入後にカバーガラスごと動かして調整したりするのですが、あまり手技が安定しません。

厚みのあるサンプルの封入について、何かコツはあるでしょうか?

蝸牛はニッチかもしれませんが、似たようなご経験がある方がいらっしゃいましたらご意見いただけますと幸いです。

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