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(無題) 削除/引用 No.10817-7 - 2022/09/27 (火) 21:12:32 - でんきえいすけ ありがとうございます。 では逆U字の場合は、データを逆さに提示している可能性もあるということですね。 どうしても、私のデータと先行研究の2つのバンドデータの分子量が逆さになっていて、同一プライマーを用いた研究のいくつかが逆U字になっているためお伺いさせてもらいました。

(無題) 削除/引用 No.10817-6 - 2022/09/27 (火) 11:13:44 - G25 >結果バンドの両端がオーバーロードになって尾を引きU字型になる。 あるいは、両端が濃く中央部が薄いアレイ型になる。

(無題) 削除/引用 No.10817-5 - 2022/09/27 (火) 10:31:04 - G25 U字型になることが多いでしょう。 なぜそうなるかと言うと、サンプルはウェルにアプライされたときメニスカスを生じて、中央に低く側壁にそって高くなるから。結果バンドの両端がオーバーロードになって尾を引きU字型になる。 それを防ぐには、 ・サンプルのボリュームを抑えてなるべく高さが出ないようにする。 ・ロードしてすぐじゃなく、10分くらい放置してから通電する。放置している間に拡散でサンプルと泳動バッファーの濃度差、組成差が緩和されてメニスカスが解消される。 ・ローディングバッファーの重み付けを粘性の高いグリセロールなどじゃなくスクロースなどにする。 私は3つ目の方法を推奨。私はスクロースでなく尿素を使っています。むかしどこかで読んだ方法で、単に重み付けだけでなくSDSやEDTAに加えて尿素でタンパク質を強力に変性してくれるのでDNAの安定性が増すとか。 おまけで付いてくるローティングバッファーや、PCR反応後そのまま泳動できるタイプのプレミックスもグリセロールベースなんでしょうがないけど。 逆U字型になるのは、おおさんの言う通りおそらくサンプルバッファーと泳動バッファの組成差が著しいのが問題でしょう。DNAの泳動ではあまり見ないけど、SDS PAGEでは起こりがち。

(無題) 削除/引用 No.10817-4 - 2022/09/27 (火) 04:54:19 - おお 凹になることがたいていだと思います。Πこういう感じの泳動はDNAではあまり記憶にありません（ないと断言しているわけではありません）。 Πの可能性として、 サンプルの塩濃度が高い場合 この場合塩濃度がある程度以上高いと電気泳動の移動度は遅れます。ただし塩は泳動中に拡散していくだろうし、はしの方から徐々に薄くなるだろうから端は先に塩濃度による遅延から開放される。ただ通常のPCRの塩濃度は５０mMぐらいでそれなら顕著に影響が出るかどうかは微妙。 サンプル（PCRmix）に正電荷、DNAにアフィニティーのあるのAdditiveなどが加えられている。スペルミジンとか。 これも経験があるわけではないのでそうだとも断定できるわけではない。 図自体が、下から上に流れている状態。 たまにそういう図を見かける。

(無題) 削除/引用 No.10817-3 - 2022/09/27 (火) 02:41:50 - でんきえいすけ PCRです

(無題) 削除/引用 No.10817-2 - 2022/09/27 (火) 02:37:34 - おお なんの電気泳動？

電気泳動　バンドの向き 削除/引用 No.10817-1 - 2022/09/27 (火) 02:19:40 - でんきえいすけ 論文を読んでいると電気泳動後のバンドの向きが、上に凹のものと下にΠのものと２つあるかと思います。何による違いなのでしょうか？

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