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(無題) 削除/引用 No.10801-6 - 2022/09/23 (金) 09:43:46 - zam >[Re:1] SEKOさんは書きました : > ケラチノサイトはもともとネオマイシンでのセレクションがしにくいと聞いたことがありますが、 ケラチノサイトはG418で分化誘導されてしまうのでセレクションには不向きだとされていますよね。

(無題) 削除/引用 No.10801-5 - 2022/09/22 (木) 15:33:55 - SEKO おお様 もし２、３日で死んでしまう濃度であれば少し条件が厳しいかもしれません。そういう場合は濃度をもう少し下げれるかもしれません。 →まさに2，3日で死んでしまう濃度でした。。。　もう少し濃度を下げて検討してみます。　ありがとうございます！

(無題) 削除/引用 No.10801-4 - 2022/09/22 (木) 15:26:04 - SEKO おお様 お忙しい中ご回答ありがとうございます。 現時点ですでにトランスフェクション効率は高い状態です。 レンチウイルスの検討はしておりませんので、そちらの検討を考慮してみます。

(無題) 削除/引用 No.10801-3 - 2022/09/22 (木) 14:18:04 - おお G418のセレクションは１週間は見ておいたほうがいいといわれます。もし２、３日で死んでしまう濃度であれば少し条件が厳しいかもしれません。そういう場合は濃度をもう少し下げれるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.10801-2 - 2022/09/22 (木) 14:11:52 - おお Transfectionの導入効率を上げる。 レンチなどを使う

ネオマイシン耐性遺伝子を導入したケラチノサイトに関して 削除/引用 No.10801-1 - 2022/09/22 (木) 13:39:49 - SEKO お世話になっております。 現在NHEK（ヒト表皮角化細胞　クラボウ社製）にネオマイシン耐性遺伝子を導入し、その後ネオマイシンにて細胞のセレクションを実施しようとしています。 通常のNHEKにネオマイシンを添加して細胞の死滅する濃度を確認し、 その前後の濃度でネオマイシン耐性遺伝子導入したNHEKに添加してセレクションしたのですが、なぜか遺伝子導入をした細胞も死滅してしまっております。。。 ケラチノサイトはもともとネオマイシンでのセレクションがしにくいと聞いたことがありますが、このような状況になった方いらっしゃいますでしょうか？ また、なにか解決策がございましたら教えていただけますでしょうか？ どうぞよろしくお願いいたします。

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