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(無題) 削除/引用 No.10760-5 - 2022/09/15 (木) 10:22:36 - tts tncknさんの目的に合うかわかりませんが、ノーマライズ目的なら細胞ライセートを回収、算出したタンパク量で補正するのが楽です。 私は普段からこの方法を使ってます。

(無題) 削除/引用 No.10760-4 - 2022/09/10 (土) 06:41:44 - おお 固定が必須でなければ、 低張のバッファーにDAPIを加えたもので細胞を懸濁して蛍光を測ればいいでしょう。バックグランドが高ければ遠心して上清を除いてDAPIフリーのバッファーでけんだくし直してもよし。低張で細胞を破裂させるという前提ですけど、どうしても気になるなら０．０１％ぐらいのTweenをDAPI含有の溶液に加えておけばいいでしょう。 あるいは膜透過性が比較的高いHoechst 33342 を固定してない細胞にPBS、HBSSなど存在下でインキュべーとして、PBSで回収、懸濁して蛍光を図るてもあります。 たんぱくに吸着するような色素（だったと思う、名前は覚えてない）を吸着させて、吸着した色素を抽出して吸収を測るという方法も見たことがあります。同様にメチレンブルーやギムザなどDNAなどに吸着しやすい色素で同様のことをしているのもありました。

(無題) 削除/引用 No.10760-3 - 2022/09/09 (金) 12:59:31 - cv 質問の回答にはなりませんが、96wellで同様のアッセイをおこなったときはクリスタルバイオレットアッセイでノーマライズしてました。

(無題) 削除/引用 No.10760-2 - 2022/09/08 (木) 14:28:04 - おお DAPIよりも回収したときに条件を選べば簡単にDNAから剥がれる色素で、DNAに結合してなくても、蛍光活性が（あるいは吸光度の吸収が）維持されているようなもののほうが良くないかな。

培養細胞を96wellに移してDAPI蛍光強度を測定する方法について 削除/引用 No.10760-1 - 2022/09/08 (木) 09:10:35 - tnckn コラーゲンコート24wellで培養細胞を育てています。 24wellのままホルマリン固定後、上清をサンプルとした実験をしたのちに、付着細胞のDAPI蛍光強度を測定してノーマライズしたいと考えています。 実験設備の都合上、最終的に遮光96wellプレートに移す必要があります。 １、DAPI染色のタイミング（24wellから剥がす前 or 後） ２、付着細胞を剥がして極力均一な溶液にする方法 についてご教授いただけませんでしょうか。 よろしくお願い申し上げます。

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