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ありがとうございます。 削除/引用 No.10747-8 - 2022/09/16 (金) 20:08:58 - m ありがとうございます。検討してみます。 ・・・井上法の変法のようです。 ・・・そんな高い効率にならないと思うのですが、、、。 フリーズショックを液体窒素でやれば、もう少し高くなるかもしれません。 ”買いコンピタント”は、明らかに効率いいです。どうやれば、あそこまでいくのか、、、

(無題) 削除/引用 No.10747-7 - 2022/09/08 (木) 14:32:58 - おお >[Re:6] totoさんは書きました : > おおさんの紹介されてるサイトで強調されてる、洗剤を使うな、ということですよね。確かに洗剤はリンスしてもリンスしても残ってしまうので、これがポイントなのかもしれません。なんとなくそれは感じていて、洗ったあとで水を入れてオートクレーブしてさらにリンスして、 洗剤を疑うならすすぎの途中で一度アルコールですすぐとましになるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.10747-6 - 2022/09/07 (水) 13:04:36 - toto おおさんの紹介されてるサイトで強調されてる、洗剤を使うな、ということですよね。確かに洗剤はリンスしてもリンスしても残ってしまうので、これがポイントなのかもしれません。なんとなくそれは感じていて、洗ったあとで水を入れてオートクレーブしてさらにリンスして、などとやってましたが、それでも、チャンピオンデータとして10^8が過去に記録されてるくらいで、ほとんどは10^7の前半です。 メーカーでは大量に専用機材を使ってそうだから、9乗オーダーを超えれるのでしょうか。フラスコ含めて全部使い捨てのでやればいけるのかなと思ったりもしましたが、この記事の考えだと、専用のフラスコで、洗いはリンスだけにするということで改善しそうなので、やる価値はありそうです。

(無題) 削除/引用 No.10747-5 - 2022/09/07 (水) 04:44:36 - おお https://openwetware.org/wiki/TOP10_chemically_competent_cells これだと５x１０＾９くらいまでは期待できるできるとされてますね。てを抜いてやっても１０＾７は余裕で超えてたような記憶があります（ただ真面目に測定してないので本当かといわれれば、、、） 菌株が変えれるなら何種類か試してみてもいいのかもしれません。

その通りです 削除/引用 No.10747-4 - 2022/09/06 (火) 09:19:10 - m みなさま、その通りです。 売っているコンピタントは（私の）井上法より２桁くらい高効率の印象。 現状、液体窒素系が無い、電気は面倒という理由で、ライブラリー用のコンピタントは購入しています。また、どーしてもコロニーが少ないすくないライゲーション（in fusionなど）も、購入したものでやってます。 購入したものは、同じー80℃保存でも、効率は高いです。ベータメルカプトエタノールを入れるコンピタントがありますが、理由は不明。効率は良いです。

(無題) 削除/引用 No.10747-3 - 2022/09/04 (日) 15:46:42 - toto メーカーでは自作でできる10＾8よりも2桁高いコンピを出してますね。たしかchemicalのでもでてたと思いますが、どうやって作ってるのか知りたいものです。

(無題) 削除/引用 No.10747-2 - 2022/09/04 (日) 10:15:19 - が なるほど、井上法だと株にもよりますがDH5aだと10^8のコンピテンシーが自作できますよね。 目標は10^10と思っていいですか？エレポのコンピ並の高効率ですが。

高効率の大腸菌コンピタント 削除/引用 No.10747-1 - 2022/09/04 (日) 05:40:39 - m 高効率のケミカル大腸菌コンピタント作成法を探しています。 井上法より１００枚程度の効率が理想です。 井上法では、ライブラリー作成に必要なレベルにいかない様です。 現在は、ライブラリーには購入したコンピタントを使っています。 （Xl-10など）

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