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(無題) 削除/引用 No.10746-4 - 2022/09/05 (月) 18:50:07 - あふ 腹腔からMpを遊離させるなら、LPSかチオグリコレート培地を腹腔内投与する必要があるかな？　24時間後には大量の細胞が拾えるはず。 すべてを氷上でやるというのはとてつもなく重要。あとは15mLファルコンチューブを低接着なものにするとよい（住友の黄緑のキャップのチューブが一番ひっつかない、Data not shown） 培養してもいいけどマクロファージって接着培養で増えるんかな？よくわかんないけど、一度接着培養すると、そのあとFACSに持ち込むのがめちゃくちゃ大変。プラ皿から全然剥がれないから。 MpをFACSに持ち込むときは、あんまり細胞懸濁液を濃くしすぎないこと。Mp同士がひっついてダブレットまみれになってしまう。密度は薄めで、しかもフロー速度をかなり速めにしないと、FACSの回路を汚すことになるので要注意。テクニシャンがいるなら必ず相談したほうがいい（昔、チオグリコレート培地投与マウス腹腔Mpをソーターに流したら、Deep cleaningでも解消されないエラーの原因になった）。 ゲートははF4/80とCd11bのダブルポジティブを使っていた覚えがある。 ソーターで回収するなら、回収した細胞を受けるチューブも低接着なものにしないとだめ。回収が終わったら、即座に遠心して細胞を沈めて、そこにBuffer RLTみたいな細胞溶解試薬を入れてボルテックスすると、RNAの収率が上がる。最終的にqPでなにかを検討したいんだよね？

(無題) 削除/引用 No.10746-3 - 2022/09/03 (土) 21:11:49 - MF kitや市販のビーズの場合はわかりませんが、オーソドックスな方法で採取するならば、緩衝液、チューブ類、遠心チューブ、シリンジ類などはあらあじめ氷中で冷やしておき分析あるいは培養に移すまでは実験工程を通して最後まで氷中で維持するのはすごい重要です。温度が上がって常温に近くなるとごく短時間のうちに器壁に強力に接着してしまい、回収率が激減します。腹腔マクロファージでの経験からですが、他の部位から採取した時もたぶん同じではと思います。 ご存知のようにマクロファージには色々な状態のものがありますので、その辺も考慮された方がいいような気がします。

(無題) 削除/引用 No.10746-2 - 2022/09/03 (土) 19:04:31 - み 脾臓からMACS磁気ビーズCD11で分離すると楽。 腹腔マクロファージも採取可能。

マウスからのマクロファージ分離 削除/引用 No.10746-1 - 2022/09/03 (土) 17:31:18 - mir いつも勉強させていただいております。 現在、LysM-Creという骨髄系細胞のCreマウスを使用し遺伝子改変マウスを作製しております。 単球マクロファージでどの程度ノックアウトされているかの確認を行いたいのですが、 末梢血や腹腔からマクロファージを取り出してそのままqPCRで確認することは可能でしょうか。それとも培養して増やすなどの行程が必要でしょうか。 ある程度純度の高いマクロファージ分画を得るには末梢血等でFACSを行うのがベターでしょうか。 ご指導のほどよろしくお願いいたします。

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