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(無題) 削除/引用 No.10716-3 - 2022/08/23 (火) 09:22:03 - 大丈夫 おおさん コメントありがとうございます。導入される遺伝子の量にもよるのでしょうけれど2、3倍程度の薬剤濃度の差でも遺伝子導入された細胞の生存が変わってくることがあるのですね。あまり情報のない細胞株を対象に安定発現株を用意しようとしており、類似の組織由来の株で汎用される濃度を基準に細胞を殺す薬剤濃度を振って検討したのですが、ずいぶんと低い濃度で細胞が死ぬことがわかり、お伺いした次第です。複数濃度で細胞をとって目的に合うものか評価してみようと思います。ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.10716-2 - 2022/08/20 (土) 11:09:44 - おお 問題が起きないかもしれないし、みんな死滅して何も生えてこないかもしれないし。 というのはわざと低濃度と高濃度でセレクションして発現量の違う細胞を作ることもしますので。またどう導入効率がいいと耐性は上がります。 ＞最低濃度の化合物存在下では未導入の細胞が死に切らない、 しばらくその濃度でいいから薬剤を入れ続けておけばいなくなるはずです。といいますかそういう濃度を最低濃度（下限）として設定するのですよね。まあ気になるならその一割二割増しにしてもいいですけど。あるいは２、３段階濃度をふって生き残っていて濃い方を選ぶとか。あとは細胞の様子を見ながら上げ下げするとか。 その最低濃度の設定で４日ぐらいから顕著に死滅していくのに、薬剤入れた翌日に劇的に変わるとかいう場合はこすぎます。その場合私ならすぐに最低濃度に戻してしばらく様子をみます（そのまま何も生えないこともマアマアありますけど）。薬剤を加えて日をおってどのように変化（死滅）していくのか観察しながら感覚をつかむのも経験のうちです。

安定発現細胞のセレクションに用いる化合物濃度 削除/引用 No.10716-1 - 2022/08/20 (土) 10:36:11 - 大丈夫 はじめて安定発現細胞をとるものです。安定発現細胞をとるときには、導入したいプラスミドにコードされた耐性遺伝子に対応する抗生物質で遺伝子導入なし細胞を死滅させることができる最低濃度を確認すると思います。仮に、最低濃度のひとつうえの濃度（例えば2倍や3倍の濃度）を選択してしまった場合にはどのような問題が起こると考えられるのでしょうか。 薬剤耐性遺伝子が細胞の染色体に組み込まれていても、導入前の細胞株を死滅させられる最低濃度を超えた抗生物質によってセレクションすると導入細胞が死滅してしまうなどあるのでしょうか。 最低濃度の化合物存在下では未導入の細胞が死に切らない、という状況になったらかなり時間をロスすることになり怖いなと思い、大変初歩的な疑問ではあるのですがこちらでお伺いしました。

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