>[Re:1] Minako Yamamuraさんは書きました :
> 結果、共培養細胞でシグナルが強く出、それは結果なのかもしれませんが、それに加え、ルシフェラーゼを発現していないA細胞だけのWellにルシフェリンを加えたサンプルでもシグナルが強くでました。そのため、Wellないの細胞密度によりシグナルが変わる可能性も考えています(Luc発現癌細胞数は同じです)
強いというのが科学的なスケールなしでは感覚で強く見えるけど実はそういう実験をやっている人の感覚ではバックグランドレベルってこともあるので、どうなのかなと。
初期のルシフェラーゼアッセイでMinimum promoterでTranscriptionが活性化してないという状態で私の実験スケールでは確か数秒の検出で１０００countsぐらいありました。典型的なプロモーターの活性化では同様の系で１０万いっても不思議ではないです。 あなたの系とどう比較していいかわかりませんけど。
> ルシフェラーゼが発現していない細胞でも基質によってルミノメーターで強いシグナルが検出されることはありますでしょうか？
基質によってっといいますが、あなたの基質やルシフェラーゼの種類は何でしょうか、、、分泌タイプのルシフェラーゼですか？
例えば分泌タイプであれば培養してない培地、Lysisする系であればLysis bufferのみでどれくらいの活性が見れますか？
最近は色々とバリエーションが増えてきたのでなんとも言えませんが、細胞自身がルシフェラーゼ活性を持つというのはあまり考えられないと思ってますが、、、 |
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