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(無題) 削除/引用 No.10704-4 - 2022/08/16 (火) 01:32:20 - おお まあ参考までにだけど、PCRがクローニングにさほど使われなかった時代、オリゴdTからRTしてライブラリーを発現ベクターで作り、Functional cloningがよくやられたけど、そうやって作った発現ベクターには３’UTRが必ず含まれている。まあそれでも大抵は発現ベクターとして機能はしている。 また場合によっては遺伝子のゲノムの配列がまるまる入った発現ベクターもあった（ゲノムのサイズで数キロ程度に収まるやつだったが）。 PCRが主流になってからは、必要最小限を簡単に増幅できるわけだし、またUTRを含めると長くなりPCRやクローニングの難易度も上がってくる。場合によってはUTRが数キロに及ぶこともあり、馬鹿正直にそういうものを含めるのもあまり賢いやり方とも思えない。

(無題) 削除/引用 No.10704-3 - 2022/08/15 (月) 12:59:22 - おお 5UTRと3UTRはアミノ酸をコードしておらず、そのことの関してはなんの意味もありません。言葉通り必要ないということ。むしろすでに指摘があるように、それ以外の機能がある場合がありそれが邪魔なことも想定できる。 もちろん、そういう機能も含め遺伝子の機能だという視点で含めて実験するのはそういう研究においては正しいかもしれない。

(無題) 削除/引用 No.10704-2 - 2022/08/15 (月) 11:12:07 - G25 目的のタンパク質を発現させるのに必須なのはそのタンパク質をコードするコード配列（CDS）だけであって、5'/3' UTRはそうではないから。 多くの場合、遺伝子導入で求められているのは、ある条件で転写されそれが速やかにタンパク質に翻訳されることだと思います。 UTRには転写後調節（翻訳調節、mRNAの安定性など）に関わっていたりしますが、そういうのは余計なパラメータが増えてかえって実験のじゃまになる。 UTRにあって必須のものと言えるとすれば、5'なら翻訳開始のKozak配列とか3'ポリA付加シグナルがありますが、それらはベクターの方に組み込まれていたり（e.g. SV40 poly A+ signal)します。KozakはCDSをPCRするときにくっつけておくことが多いかも。Kozakを無視する人もいるかも。

UTRが強制発現プラスミドに入らない理由。 削除/引用 No.10704-1 - 2022/08/14 (日) 19:26:29 - 初心者 ある遺伝子の強制発現プラスミドを作成したいです。 プロモーターはCMVでベクターはpcDNA3.1なのですが、5UTRと3UTRを入れる必要ないと言われました。 CDSだけPCRすれば良いとのことですが、この理由を教えて下さい。

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