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(無題) 削除/引用 No.10686-3 - 2022/08/06 (土) 23:46:24 - ４５６７ 収量については減ることはあるかもしれないけど、増えることは期待できないと思います。x9Hisの利点は（てか、あえて６をわざわざ９に増やした理由は）より強い条件でレジンを洗浄して非特異的な結合をしてる分子を除いて精製度を上げるためと思います。大腸菌ではあまり気にならないのですが、哺乳類細胞でHis-tag精製してもHis-tag以外のタンパク質がかなり混入するのでこれ単独では精製が難しいのです。核タンパク質を中心にHisのクラスターのような配列は哺乳類の色々なタンパク質で割と散見されるらしいです。昔、そういうのを調べた論文がありました。それでx9にして精製したいタンパク質をより強固に結合させといて中程度の濃度のイミダゾールで洗って、弱くついたそういうのを洗って分別するのです。結合が強固ということは言い換えれば回収率が良くないとも言えますので、精製度が上がる分、収率は多少目を瞑るということになるのかなと。

(無題) 削除/引用 No.10686-2 - 2022/08/06 (土) 09:23:34 - おお doi.org/10.1006/prep.1997.0766 6×で殆どついてしまうケースも多いのですごく収量が上がるというイメージはないですけど、上記の論文ではアフィニティーが強くなって厳しい条件でカラムが洗えるため純度が上がったという結果を示してます。もし洗う条件で純度を気にしていくらかロスしてしまうような条件にせざる負えないなら収量は上がるでしょう。 また、どういうわけかあまりカラムにつかずスルーしてしまうと言うなら、もしかしたら収量がかなり改善される可能性はあると思います。長くなった分立体的障害をかいくぐって伸びてきたとか言うのもありそうですし。ただそれも可能性でしかありません。

タンパク質精製時のHis tagについて 削除/引用 No.10686-1 - 2022/08/05 (金) 22:14:10 - taro His tagは、一般的に6×が用いられていますが、9×にすると収量の向上等、ありますでしょうか。

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