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(無題) 削除/引用 No.10677-4 - 2022/08/02 (火) 09:57:38 - zam とりあずmockと比較検討してみてはどうでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.10677-3 - 2022/08/02 (火) 09:33:32 - おお 比較的早く効く（１日とか）薬剤の耐性マーカー（blasticidinとかPuromycin）なら、導入翌日から２４時間処理して、培地を薬剤耐性なしにしてさらに１日ぐらいおいて、生細胞を集めるという手は取れなくもない。 生細胞を集めるにはdead cell removal kitとか検索すれば出てくるが（多分アネキシンとかでトラップするのだろけど）、パーコールでDensityによっても分けれると思う。パーコールとかは浮遊細胞なら使いやすいのではないかと。いちおうDensityで分けるキットもあるみたいだなぁ。

(無題) 削除/引用 No.10677-2 - 2022/08/02 (火) 09:02:05 - mp プラスミドDNAの導入でも一時的にいろんな遺伝子が動くとは思いますけどね。GFPなどのマーカーでソーティングするのはどうでしょうか？

浮遊性培養細胞にプラスミドを導入後、RNA-seq 削除/引用 No.10677-1 - 2022/08/02 (火) 06:36:45 - 654 浮遊性培養細胞に一つの遺伝子に対する様々なデザインのプラスミドを導入し、RNA-seqを行いたいと考えています。が、方法論に難渋しています。 浮遊性培養細胞で問題になるのが、プラスミドの導入効率ですが、ウイルスを使うといろいろな遺伝子が動くので、正直あまり使いたくありません。 現段階では、薬剤耐性で生き残った細胞群を解析するのがベストと考えていますが、別のオプションとして、stableを複数クローン取ってきて、比較するというのも検討しています。 薬剤耐性の場合、死細胞除去のために、やはり2週間とか4週間くらいは、培養する必要がありますよね。

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