BioTechnicalフォーラム [FACSで赤色蛍光と組み合わせ可能な死細胞除去色素]

FACSで赤色蛍光と組み合わせ可能な死細胞除去色素

No.10667-TOPIC - 2022/07/28 (木) 13:14:25 - AA

お世話になります。

現在、マウス組織から分散したmCherry発現細胞のFACSでの分取を検討しております。
死細胞除去のために色素試薬を検討しているのですが、手元にある7-AADは
mCherryの励起/放出極大波長＝587nm/610nm
に対して
7-AADの励起/放出極大波長＝540nm/645nm
と波長帯が近いため、より差がある色素のほうが適切ではないかと考えております。

死細胞除去色素ではもっぱらPIや7-AADが用いられているようで、ThermoのLIVE/DEADのようなものもあるにはあるのですがあまりポピュラーではない印象を受けました。

そこでお伺いしたいのですが、皆様は赤色蛍光標識に対して組み合わせる死細胞除去色素には何をお使いでしょうか？
気にせず7-AADでも構わないのか、青色波長の色素のほうが良いのか、などご意見賜れますと幸いです。

よろしくお願いします。
　

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No.10667-5 - 2022/08/01 (月) 17:30:48 - AA

皆様

コメントいただきありがとうございます。
Zombie Dyeが選択肢が多く価格も手頃で良さそうに感じました。
手元の共通機器のセルソーターが黄色レーザーがなく、mCherryも青色で無理やり励起していた関係でUVが励起が好ましく、ちょうど今キャンペーン中でしたので早速購入してみました。

手元に届きましたら使用感などご報告できればと思います。

ご意見ご指摘大変ありがとうございました。

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No.10667-4 - 2022/07/30 (土) 22:04:38 - zam

SYTOX Greenはどうですか？FITCと同じフィルターでいけます。

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No.10667-3 - 2022/07/30 (土) 10:03:05 - Tracker

死細胞除去が目的なら7-AADをブルーレーザー(488 nm)で励起してゲートアウトしておいて、その上でイエローレーザー(561 nm)でmCherryを叩けば良いのでは？

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No.10667-2 - 2022/07/28 (木) 17:50:52 - ema

Zombie Dyes　が色々な色素を販売しているので、本当に染めたい抗体とは離した波長で選択しています。