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(無題) 削除/引用 No.10644-5 - 2022/07/22 (金) 10:34:40 - penicillin "ぽー"様 返信ありがとうございます。 これまでも既報通りの配列のプライマーでかからないことはありましたが、試薬の違いが影響することもあるんですね。

(無題) 削除/引用 No.10644-4 - 2022/07/22 (金) 09:57:26 - ぽー qPCRに関しては同じプライマーでもやってみないと分からないという印象です。 というのも、PCRの試薬が違ったり、機械が違ったりすると、 同じプライマーでもかかったりかからなかったりするものがあります。 実際に、とある遺伝子で、キャプラリーPCRではうまくいくプライマーが96wellではだめだったことがあります。

(無題) 削除/引用 No.10644-3 - 2022/07/22 (金) 02:36:22 - penicillin "おお"様、返信ありがとうございます。 “doi.org/10.1161/ATVBAHA.120.315255 doi: 10.1189/jlb.1209822" →この論文くらいしか見当たらず、このプライマーでやってみましたが、私の骨髄マクロファージではworkしませんでした。 "抗体は独自にカタログなどから組織などで十分使えているものを探すのもありだと思うが。" →そうですよね。既報で使用したものがなければ、別の細胞種になるとしても使用実績が多い抗体をカタログから選んで試してみるしかないのかな、と思っています。

(無題) 削除/引用 No.10644-2 - 2022/07/21 (木) 17:19:19 - おお doi.org/10.1161/ATVBAHA.120.315255 doi: 10.1189/jlb.1209822 楽観的に見て大丈夫だろうと言う感覚はあるのだが、プライマーだと、組織からRNAを取ったもので、あるいはperitoneal macrophagesを単離して（たぶん培養せずに）RNAをとってPCRしているものもあるので（上記）、参考にならんかな。 抗体は独自にカタログなどから組織などで十分使えているものを探すのもありだと思うが。 比較できるデーターという観点では同じ抗体、プライマーのほうがいいという理屈もある。

プライマー・一次抗体を既報と同じものが使えるかどうか 削除/引用 No.10644-1 - 2022/07/21 (木) 16:08:47 - penicillin qPCR用プライマー及びwestern blot用一次抗体について御教授頂きたいです。 既報にある配列でqPCR用プライマー・一次抗体を注文して使用することを考えています。 使おうとしている細胞は、マウス由来の初代培養細胞ですが、その遺伝子・タンパクを同じ初代培養細胞で確認している論文が見当たらなかったのですが、マウス由来の細胞株で細胞種・由来臓器も同じ細胞でそれらを確認している論文がありました。 具体的には、初代培養のマクロファージのCsf-1という分子のmRNAとタンパク発現を確認したいと考えておりますが、既報で同じ条件のものが見当たりませんでした。J774A細胞(マウスマクロファージの細胞株)で使用しているデータを見つけました。この場合、細胞株で使用しているプライマーや抗体は初代培養細胞でも使用できるものでしょうか？ 御教授頂けたら幸いです。よろしくお願い致します。

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