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Re:　細胞が分化の途中で死んでしまう 削除/引用 No.10636-9 - 2022/07/19 (火) 10:18:01 - 細胞 細胞の実験は面倒でも、細胞数/容器の面積　で計算した方がうまくいく場合が多いです。 うまく細胞が分化してくれた100�pディッシュでは、約13000/cm2で、うまくいかなかった6 well plateでは、約3200/cm2で、明らかに面積当たりの細胞数が少ないですね。 どうぞご参考になさってください。

(無題) 削除/引用 No.10636-8 - 2022/07/19 (火) 07:59:22 - おお C2C12はコンフルに達すると通常のGrowth mediaでも分化を始める細胞です。なので分化させるときもほぼConfluentの状態でDifferentiation mediaに変えるのがたいていだと思います。 また、分化の過程である程度の割合の細胞が死にます。なので死んでいる細胞がいても不思議ではないですが、あなたの実験に関してそれが妥当な細胞死なのかどうかは判断する材料がありません。 以下のURLでみると、１０cmと６Wellの面積比は大体６から７分の一でしょうか。なのであなたの実験では若干薄めに巻いているということになります。６Wellでこれまでの２倍量まくか、分化させるタイミングをもう一日ずらすかしてもいいかもしれません https://www.thermofisher.com/us/en/home/references/gibco-cell-culture-basics/cell-culture-protocols/cell-culture-useful-numbers.html

(無題) 削除/引用 No.10636-7 - 2022/07/19 (火) 06:30:34 - iiii この細胞をつかって分化させる実験は行ったことはないのですが、手技や試薬に問題があるというよりは、細胞を撒いた数あるいは、分化前のコンフルエントのジャッジが間違っているのではないかと考えておられるということで、 ６wellへ撒く細胞数はどのように決めましたか？10cm wellに1*106cells /well撒いたらうまくいくということですので、10cm wellと６wellの表面の面積比を調べてその比で６wellへ撒く細胞数を計算するといいと思います。

(無題) 削除/引用 No.10636-6 - 2022/07/19 (火) 05:36:12 - ＢＣ３ 1*106cells /wellです。

(無題) 削除/引用 No.10636-5 - 2022/07/19 (火) 05:32:27 - iiii うまくいく10cm wellでは、でした。ごめんなさい

(無題) 削除/引用 No.10636-4 - 2022/07/19 (火) 05:31:09 - iiii うまくい10cm wellでは細胞はいくつ撒いていますか？

(無題) 削除/引用 No.10636-3 - 2022/07/19 (火) 04:59:37 - ＢＣ３ 1*105cells /wellは６wellです。

(無題) 削除/引用 No.10636-2 - 2022/07/19 (火) 04:52:08 - iiii >[Re:1] ＢＣ３さんは書きました : > ６wellで培養を行っていると分化２日目で死んでしまうことが頻回に起こります。 > 一方で、同時に培養を行っている10cm wellで行うとうまくいきます。 > 1*105cells /wellで撒いています。 どちらのプレートにこの細胞数を撒いていますか？６well? 10cm well?

細胞が分化の途中で死んでしまう 削除/引用 No.10636-1 - 2022/07/19 (火) 02:47:12 - ＢＣ３ 細胞培養を行っています。素人です。 C2C12細胞で培養の練習を行っています。 ６wellで培養を行っていると分化２日目で死んでしまうことが頻回に起こります。 一方で、同時に培養を行っている10cm wellで行うとうまくいきます。 手技や試薬に問題があるというよりは、細胞を撒いた数あるいは、分化前のコンフルエントのジャッジが間違っているのではないかと考えています。 最初に撒く細胞の数は非常に重要なのでしょうか？1*105cells /wellで撒いています。 コンフルエントのジャッジも非常に重要なファクターなのでしょうか？上記の数で撒いた後、２-３日後に分化をさせています。100%に達していないとは思っていないため、細胞数が超過していることが原因と考えています。

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