Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る | トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

生成した抗体量を測定する方法 トピック削除
No.10628-TOPIC - 2022/07/16 (土) 05:00:30 - 小謡
先日抗体産生細胞を培養するときのシェイカーの扱いについて質問させていただきました。その説は大変お世話になりました。

お叱りを受ける覚悟で質問させていただきたいのですが、Protein AでIgGをpurifyして透析にかけて、その後集めたIgGをquantificationするのはどのアッセイで行うのが正しいのでしょうか?教授はNanodropをとりあえず示したのですが、これは芳香族アミノ酸のトリプトファンやチロシンが280 nmの紫外光を吸収するのでこの吸光度からタンパク質濃度を見積もる、という原理のようですがこれってIgGにはあてはまりませんよね?どのアッセイでやるのが正しいのでしょうか?よろしくお願いします。
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



44件 ( 1 〜 20 )  前 |  1/ 1. 2. 3. /3


(無題) 削除/引用
No.10628-45 - 2022/07/20 (水) 01:17:51 - 小謡
>[Re:44] ななしさんは書きました :
> 回答者がそのスタンスでいることは構わないしありがたいですが、それに対して質問者が「時間がある人だけ答えてくれればいいから時間の無駄というなら放っておいてくれ」というような開き直りはいかがかと思います。
開き直りといいますかそりゃ時間がある人が答えていただければありがたいです、時間の無駄だと思われるならもちろん放っておいてもらってかまいません、というのが普通じゃないですか?忙しかろうが俺の質問に答えろ、なんてさすがに言いませんよ。どうすればよかったのでしょう。
よくこの掲示板を拝見しますが質問をしてどなたかが回答をしてそこで終わっているのが多いですよね。私はせっかくみなさんがお忙しい中レスをしていただいたのでなるべく返事やお礼を言いたい、時間の無駄と思うのでしたらもちろん結構です、というのが悪かったのでしょうか。

> 質問者は少なくとも大学生以上(相当)と思って対応している人がほとんどでしょうから、それなりの社会性は持っていてほしいものです。
社会性ねぇ。。。
> 入門書なりプロトコル集なりを少しは読んできてから質問してこい。
> オマエが気づいてないだけで、オマエが
どうすればよかったんでしょうね。次回質問する機会があったら考えます。

(無題) 削除/引用
No.10628-44 - 2022/07/19 (火) 11:23:44 - ななし
>[Re:39] LPSさんは書きました :
> 質問に対して決まった担当者がいるわけでもないですし、愚問であろうがなかろうが時間が取れる方が返事をするというスタンスなので、まあ、いいんじゃないって思うんですけど、如何でしょう?

回答者がそのスタンスでいることは構わないしありがたいですが、それに対して質問者が「時間がある人だけ答えてくれればいいから時間の無駄というなら放っておいてくれ」というような開き直りはいかがかと思います。
開き直りに怒る回答者がいても仕方ないと。それこそ「無駄」な場外乱闘にこの場を使うのは駄目ですが。
質問者は少なくとも大学生以上(相当)と思って対応している人がほとんどでしょうから、それなりの社会性は持っていてほしいものです。

(無題) 削除/引用
No.10628-43 - 2022/07/19 (火) 11:05:51 - 小謡
>[Re:42] いい加減にしなさいさんは書きました :
> 入門書なりプロトコル集なりを少しは読んできてから質問してこい。
あぁ、わかったよ。

(無題) 削除/引用
No.10628-42 - 2022/07/19 (火) 10:59:47 - いい加減にしなさい
入門書なりプロトコル集なりを少しは読んできてから質問してこい。

(無題) 削除/引用
No.10628-41 - 2022/07/19 (火) 10:13:23 - 小謡
Pubmedを引いたりもするのですがうまくひっかからなかったりもしたんですよね。検索もかけたりもしたのですがいろいろあるので「これ」というのがなかなか見つからないといいますか。(ところで見つけるの上手ですね。うやらましいです。)私も練習します。あとちょっと思い出したのが、以前に「プロテインはナノドロップでは測れるけど普通は測らない、測る人はほぼいない」ということを言われたような?それが頭の片隅にあって「大丈夫なのかな?実際みなさんは使われているのかな?」と不安になったのもあります。その先輩がどういう意図でそう言ったのかは今となってはわかりません。

上司もナノドロップ使ったことがないからわからない、と。ですのでこちらでもいろいろと勉強させてもらっています。リンクありがとうございました。またゆっくり見てみます。

・・・次回予告的に、SDS-PAGEも怪しいのでまたトピックを立てるような気がいたしますのでそのときもよろしくお願いします。。。もちろんお時間があるときで結構ですので。LSPさんもありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.10628-40 - 2022/07/19 (火) 09:29:33 - おお
いろいろ遠回りもしているのですが、一番早い解決方法はなにかプロトコールとしてPublishされたもの、されたものを参考にしているものをみるのが早いし、実験を始めるときにそういうのを調べるべくだったのかもしれません。その上での議論ならまだしも、こういう場でなんの予備知識なしに聞くと場合によっては変な回答がついてそれを信じてやってみたはいいが、、、みたいな結果にもなりがちです。

わからなかったら聞いてみるのも悪くはないですが、文献調査もある程度やったほうがよかったのだろうと思いますし、最初にそういうものを示していれば議論もちょっとは変わったかもしれません。

例えば
https://currentprotocols.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/0471142727.mb1111s37
Antibody concentration may be estimated by measuring absorbance at 280 nm. A mouse IgG solution at 1 mg/ml = 1.44 absorbance units.

https://www.euromabnet.com/protocols/production-large-quantities-mab.php
An estimate of the concentration can be obtained by measuring the absorbance at 280 nm. 1 mg/ml IgG has an A280 of 1.4.

BCAでも測れるといえば測れます。ただグリセロールを最終的に入れるプロトコールが見受けられますし、グリセロールはBCAに反応してないときより高い吸光度になります。

(無題) 削除/引用
No.10628-39 - 2022/07/18 (月) 23:35:54 - LPS
ここのフォーラムの皆さんは優しいですよね。私の愚問にも丁寧に答えてくださっています。
確かに、たまに脱力しそうな質問とか、要領を得ない質問もあったりしますが、文句を言いながらも何とか解決策を提示して下さいます。
ここのフォーラム、主旨は一応上がっていますが、質問に対して決まった担当者がいるわけでもないですし、愚問であろうがなかろうが時間が取れる方が返事をするというスタンスなので、まあ、いいんじゃないって思うんですけど、如何でしょう?

(無題) 削除/引用
No.10628-38 - 2022/07/18 (月) 23:13:32 - 小謡
>[Re:37] ななしさんは書きました :
> NanodropでIgG定量できないというのが何か特殊ケースなのか厳密な定量をしたいという意味かと思ったら、質問者がIgGがタンパク質と思っていなかったオチ
> …は回答する側には脱力もの。
やりとりする中で質問の意図をくんで時間がある人が回答をしていただくんですよね。

> アンケートやら人生相談やら含め、様々な質問がありますが、ここの本来の趣旨としてはテクニカルなことについての有用な情報を共有し、同じトラブルにあった人が参照し、リソースの無駄を減らそうということでしょう。
> 教科書レベル以下のことをグダグダ言って、質問者の役には立っても他の人に有用性がないなら「無駄」です。
もちろん無駄に思えた人もいらっしゃるでしょうが少なくとも私には有用です。おっしゃる通り、この掲示板ではアンケートやら人生相談やら含め、様々な質問をした人がいらっしゃいましたが、他の人にとっては無駄だと思われてもその人たちだって有用な回答を得られた人だっていると思いますよ。

> 生化学の講義があったかも覚えてない人に「自分にはためになったので無駄じゃない」と言われたら回答者は呆れて去るか腹も立てますよ。
そうですか?知らないことは知らないと言った方がよくないですか?「でしたら生化学はひととおり目を通してください」でわかりましたとなってそれでいいのではないでしょうか。

> こういうところはある程度の素養があって、助言をもらって自分で解決できるか、助言を元に指導者と相談して解決できる人向けです。
はい、ですのでいただいた助言を元に指導者と相談して解決していく次第ですし、
> アンケートやら人生相談やら含め、様々な質問があります
私の質問もその様々な質問の一つです。

> 口を開けて待っていたら何から何まで教えてくれるというサービスではないので、それはどこかに有償で頼んで下さい。
>
>
> 学内ベンチャーの技術補佐か何かですかね、どうでもいいけど。

(無題) 削除/引用
No.10628-37 - 2022/07/18 (月) 17:49:19 - ななし
NanodropでIgG定量できないというのが何か特殊ケースなのか厳密な定量をしたいという意味かと思ったら、質問者がIgGがタンパク質と思っていなかったオチ
…は回答する側には脱力もの。

アンケートやら人生相談やら含め、様々な質問がありますが、ここの本来の趣旨としてはテクニカルなことについての有用な情報を共有し、同じトラブルにあった人が参照し、リソースの無駄を減らそうということでしょう。
教科書レベル以下のことをグダグダ言って、質問者の役には立っても他の人に有用性がないなら「無駄」です。
生化学の講義があったかも覚えてない人に「自分にはためになったので無駄じゃない」と言われたら回答者は呆れて去るか腹も立てますよ。

こういうところはある程度の素養があって、助言をもらって自分で解決できるか、助言を元に指導者と相談して解決できる人向けです。
口を開けて待っていたら何から何まで教えてくれるというサービスではないので、それはどこかに有償で頼んで下さい。


学内ベンチャーの技術補佐か何かですかね、どうでもいいけど。

(無題) 削除/引用
No.10628-36 - 2022/07/18 (月) 16:58:04 - ええっ?
>ムダなやりとりありました?

オマエが気づいてないだけで、オマエが正確な情報を出さないせいでかなりの無駄が生じてるのですが・・・

(無題) 削除/引用
No.10628-35 - 2022/07/18 (月) 15:09:51 - 小謡
>[Re:34] いやいやさんは書きました :
> 忙しかったり仕事の手を止めてなかったとしても、情報小出しが原因の無駄なやり取りは誰も望みませんよ。
ムダなやりとりありました?コメントは私の質問へのコメントですよね、すべて勉強になっていて助かっています。

(無題) 削除/引用
No.10628-34 - 2022/07/18 (月) 14:55:36 - いやいや
忙しかったり仕事の手を止めてなかったとしても、情報小出しが原因の無駄なやり取りは誰も望みませんよ。

細胞培養ができる環境なのにタンパク定量が困難な状況がにわかには理解できない。

(無題) 削除/引用
No.10628-33 - 2022/07/18 (月) 11:27:52 - 小謡
>[Re:32] それを言ったらおしまいさんは書きました :
> >書く労力がそこまであるのでしたら無視していただければいいと思います。
>
> 以後、無視ということで…
お忙しかったりお仕事の手を止めてまでしていただくことではないですよ、と言う意味ですので。

(無題) 削除/引用
No.10628-32 - 2022/07/18 (月) 11:15:05 - それを言ったらおしまい
>書く労力がそこまであるのでしたら無視していただければいいと思います。

以後、無視ということで…

(無題) 削除/引用
No.10628-31 - 2022/07/18 (月) 10:12:45 - zam
散々様

> バイオテロを画策していて、自宅ラボで培養して病原性、致死性物質を作ろうとして、ネットで情報を探しているとか、がその事情の例ということも考えられます。
> アドバイスする人は、なんでもアドバイスすることはリスクがあることも自覚する必要があります。

そうですね。うかつでした。以後気をつけます。

(無題) 削除/引用
No.10628-30 - 2022/07/18 (月) 09:57:48 - 小謡
>[Re:27] 散々さんは書きました :
> 自宅ラボで培養して
ちなみにですが私は自宅でまで培養したくありません。そこまで熱心ではないです。。。

(無題) 削除/引用
No.10628-29 - 2022/07/18 (月) 09:56:01 - 小謡
>[Re:28] マナーがなっとらんさんは書きました :
> 違いますよ。教える側が無駄なやり取りをしなければならなくなったことについてですよ。善意に支えられてる掲示板です。書く側の労力も少しは理解しましょう。そう考えると、極力効率よくやり取りできるように貴方が先に必要な情報を提示するべきだという考えに思い至りませんか?
必要な情報が何なのかもわからなくないですか?だからこその掲示板でのやりとりがあるんじゃないですかね?私は本当にありがたいと思っていますし勉強になりますし、書く労力がそこまであるのでしたら無視していただければいいと思います。

(無題) 削除/引用
No.10628-28 - 2022/07/18 (月) 09:43:54 - マナーがなっとらん
> 私は無駄なやり取りがあったとは思っておりません。

違いますよ。教える側が無駄なやり取りをしなければならなくなったことについてですよ。善意に支えられてる掲示板です。書く側の労力も少しは理解しましょう。そう考えると、極力効率よくやり取りできるように貴方が先に必要な情報を提示するべきだという考えに思い至りませんか?

(無題) 削除/引用
No.10628-27 - 2022/07/18 (月) 09:34:30 - 散々
>[Re:25] zamさんは書きました :
> 分光光度計も持たず借りることもできない状況でIgG精製する状況は、正直なところ意味不明なのですが、きっとご事情がおありなのでしょう。

バイオテロを画策していて、自宅ラボで培養して病原性、致死性物質を作ろうとして、ネットで情報を探しているとか、がその事情の例ということも考えられます。
アドバイスする人は、なんでもアドバイスすることはリスクがあることも自覚する必要があります。
バイオ実験は指導者の下で実施することが基本です。

(無題) 削除/引用
No.10628-26 - 2022/07/18 (月) 09:26:24 - 小謡
>[Re:25] zamさんは書きました :
> 無駄なやり取りをせずに済んだと思います。
私は無駄なやり取りがあったとは思っておりません。いろいろ話を伺えてよかったと思っております。ありがとうございました。

44件 ( 1 〜 20 )  前 |  1/ 1. 2. 3. /3


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール   アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存(次回の入力の手間を省けます)
上に上げない(トピックの一覧で一番上に移動させません)
解決(問題が解決した際にチェックしてください)
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 

〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。