ウエスタンブロットのトラブルです。
半年位前から、徐々にバンドの検出が著しく弱いもしくは検出できない状態です。
１次抗体、2次抗体をリフレッシュしても、効果はありませんでした。
転写エラーの確認のため、PVDF転写後ゲルをCBBで染色すると、
何故か低分子側に行くにつれタンパクの残りが増えますが、
検出できない高分子側は転写されているようです（これはこれで不思議ですが）。
よって、タンパクも抽出できていると考えています。
残りのケミルミのヘタリの可能性もあるかもですが、未確認です。
一般的に、検出が出来ない原因は、
他に何が考えられますか？
ウエスタンでトラブルの経験がなく、
トラブルノウハウの蓄積がないので質問しました。 |
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