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反応液、基質調整液に使用する0.05M酢酸緩衝液について トピック削除
No.10602-TOPIC - 2022/07/05 (火) 12:50:50 - ちゅん
実験初心者です。現在、牛のルーメン液とCMC溶液を24℃で30分振とう培養し、反応させ、ソモギー・ネルソン法により還元糖の計測をしようとしています。反応液、基質調整液に0.05M酢酸緩衝液を使用するのですが、どの段階で使用するのかわかりません。ルーメン液とCMC溶液を混ぜたときに一緒に入れてしまうのでしょうか?それとも、24℃で30分振とう培養して反応させてから入れてしまうのでしょうか?教えていただきたいです。よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.10602-4 - 2022/07/06 (水) 10:46:31 - zam
恐らくですが、ルーメン液に存在するセルロース分解菌の出すセルラーゼ活性を測定されたいものと推測いたします(qqq様ご提示の東北大の報告も参照のこと)。
CMCはセルラーゼ活性測定の基質、0.05M酢酸緩衝液はセルロース分解反応の停止と推測いたします。

実験系の流れとしては、
(1)ルーメン液とCMC溶液を一定条件で反応させる。
(2)0.05M酢酸緩衝液で反応を停止する。
(3)ソモギーネルソン法にて反応液中のCMC分解物(還元糖)を測定する。
と推測いたします。

したがいまして、質問者様の
> 24℃で30分振とう培養して反応させてから入れて
でよろしいかと存じます。

なお他の方々が仰るとおり、確実なことは指導者の方から教えていただくのがよろしいかと存じます。

(無題) 削除/引用
No.10602-3 - 2022/07/06 (水) 01:13:07 - おお
ソモギー・ネルソン法自体には酢酸緩衝液は必要なさそうですねぇ。ということは、、、ある程度想像がつくと思いますが、サンプル調製は目的により方法が違ってきますので、ここの回答は当てにならないでしょうね。

目的はなんですか?ルーメン液内の還元糖の量の測定ですか?ではなぜCMCを使うのですか?それともルーメン液内のセルラーゼの活性を測るのですか?

方法以前の問題ですね。目的などについて整理して指導している人などと相談してください。

(無題) 削除/引用
No.10602-2 - 2022/07/05 (火) 16:21:14 - qqq
初心者ならここの有象無象に聞くより指導者に教わるか資料を貰うなどすべきですが…。

自分はこの分野に明るくないので教えられませんが、「還元糖 定量 ソモギー法 酢酸緩衝液」で検索するとそれらしいプロトコルはいろいろ出てきます。
これはあなたのやっていることに近いんじゃないかな。
https://www.jstage.jst.go.jp/article/jsmcwm/25/0/25_275/_pdf/-char/ja

反応液、基質調整液に使用する0.05M酢酸緩衝液について 削除/引用
No.10602-1 - 2022/07/05 (火) 12:50:50 - ちゅん
実験初心者です。現在、牛のルーメン液とCMC溶液を24℃で30分振とう培養し、反応させ、ソモギー・ネルソン法により還元糖の計測をしようとしています。反応液、基質調整液に0.05M酢酸緩衝液を使用するのですが、どの段階で使用するのかわかりません。ルーメン液とCMC溶液を混ぜたときに一緒に入れてしまうのでしょうか?それとも、24℃で30分振とう培養して反応させてから入れてしまうのでしょうか?教えていただきたいです。よろしくお願いいたします。

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