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(無題) 削除/引用 No.10588-7 - 2022/07/02 (土) 07:59:18 - おお ありがとうございました。細胞によっては毒性がでるのですね。たしかにDNAが侵入するわけで細胞もSelf defense mechanismを持ってるでしょうから敏感な細胞もあるということかもしれませんね。GFPで蛍光強度があまり変わらなかったというのも参考にさせていただきます。 とにかくは多めのDNAでやってみて様子を見てみようと思います。ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.10588-6 - 2022/07/02 (土) 07:20:33 - zam 私の経験上ですが、DNA量に上限はありました。 上限を超えると死滅細胞が増え、全体の効率が下がりました。 初代細胞の場合は、エレポ後の生存可能なDNA量の範囲が狭かったです。ちょっとでも濃いDNAを入れると死滅しました。 しかしCHO細胞は、実験で扱える程度の濃いDNAをエレポしても細胞は死にませんでした。 ただし、GFP発現プラスミドを入れた場合ですが、ある濃度以上のDNAを入れても蛍光強度は増えませんでした。この辺はコンストラクトに依存するかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.10588-3 - 2022/07/02 (土) 07:05:54 - おお ありがとうございました。お礼遅くなりました。単純に量を上げると効率や量もそれなりに上がると思って良さそうですね。

(無題) 削除/引用 No.10588-2 - 2022/06/30 (木) 07:36:16 - み 他機種ですが増やしたらDNAと細胞の接触頻度が上昇するだろうから導入数は増えると思っています。 同じマイクログラム数でもプラスミドサイズが大きくなるとモル数が少なくなるので、大きなプラスミドの時は多くします。

エレクトロポレーション 削除/引用 No.10588-1 - 2022/06/30 (木) 03:57:07 - おお エレクトロポレーションやNucleofectorでつかう発現プラスミドベクターの量ですけど（人とかマウスの細胞です）、たとえばNucleofector（２dか以前のやつ、初期型といえばいいかな）では２から４マイクログラム程度を１回のTransfectionにつかうプロトコールが多いですがDNAの量って上げれば効率や発現強度が上がるもんでしょうか。たとえば２から４マイクログラム程度のプロトコールで１０から１６マイクログラムぐらい使ってみるとどんなもんでしょうか？

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