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ER-Golgiの輸送経路の評価方法 トピック削除
No.10582-TOPIC - 2022/06/27 (月) 13:40:49 - cell
いつも勉強させていただいています。

色々検索したのですが、なかなか見つからないので、質問させていただきます。
ヒト細胞でERとGolgiを介した輸送系が正常に機能しているか評価したいと思っています。酵母ではmCPYとproCPYの量をWBでみて評価できるようですが、哺乳類細胞でも同じような評価ができるタンパクやキットなどあるのでしょうか。
 
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(無題) 解決済み 削除/引用
No.10582-7 - 2022/06/30 (木) 09:20:26 - cell
VSVG-GFP でもできるのですね。参考になります。
今回扱っているヒト細胞はトランスフェクション効率が悪いので、とりあえずはSREBPでやってみようと思います。

(無題) 削除/引用
No.10582-6 - 2022/06/29 (水) 16:06:54 - TOKIO
昔からthermosensitive VSVGを使っていた様な気がします。
https://www.researchgate.net/figure/ER-to-Golgi-transport-of-VSVG-GFP-visualized-upon-shift-from-40-C-to-32-C-or-in-cells_fig2_13932146

(無題) 削除/引用
No.10582-5 - 2022/06/28 (火) 07:45:18 - momo
専門外なのですが、教科書での知識でいえば小胞輸送でノーベル賞を取ったRothmanの仕事はVSVのGタンパク質の糖鎖修飾を使っていましたね。今だとVSV-G-GFPを使うのかな。

(無題) 削除/引用
No.10582-4 - 2022/06/28 (火) 02:16:39 - おお
>[Re:3] cellさんは書きました :
> SREBPですか。脂質代謝には詳しくなくて知りませんでした。
> 試してみたいと思います。
> ありがとうございました。

SREBPを切っているエンザイムはMBTPS1と2みたいだからその基質を探ってみてもいいかもしれないね。
https://www.uniprot.org/uniprot/Q14703
https://www.nature.com/articles/s41598-018-32705-7

(無題) 削除/引用
No.10582-3 - 2022/06/27 (月) 15:35:20 - cell
SREBPですか。脂質代謝には詳しくなくて知りませんでした。
試してみたいと思います。
ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.10582-2 - 2022/06/27 (月) 14:45:43 - おお
https://www.jbc.org/article/S0021-9258%2820%2967725-0/fulltext
https://www.jbc.org/article/S0021-9258%2820%2944260-7/fulltext
なんとなく検索してみた

ER-Golgiの輸送経路の評価方法 削除/引用
No.10582-1 - 2022/06/27 (月) 13:40:49 - cell
いつも勉強させていただいています。

色々検索したのですが、なかなか見つからないので、質問させていただきます。
ヒト細胞でERとGolgiを介した輸送系が正常に機能しているか評価したいと思っています。酵母ではmCPYとproCPYの量をWBでみて評価できるようですが、哺乳類細胞でも同じような評価ができるタンパクやキットなどあるのでしょうか。

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