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gibco RPMI
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No.10568-TOPIC - 2022/06/21 (火) 12:52:09 -
gib
gibcoRPMI (グルタミン入り、液体のもの)に関する質問です
500mlの培地に対して約100mlのFBSを入れたいのですが(final 20%FBSにしたい)
そのままだと培地の容器の容量的に無理なので培地瓶か何かに一部移してそこでFBSを入れようかと考えています
この場合、培地瓶に移した後でオートクレーブはした方が良いのでしょうか?
粉のRPMIを作る場合グルタミンはオートクレーブ後に入れていたような気もします
迷うところですご助言お願いします
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No.10568-6 - 2022/06/21 (火) 23:02:44 - bjm
培とりあえず500m培地から100mlを無菌的に50mlファルコンチューブ2本に移して、400mlにして、そこに100mlのFCS入れればいいだけの話じゃないでしょうか。
グルタミンは熱かけると分解してよろしくないものが生じるので、加熱はできません。なのでグルタミン添加培地は0.22μmフィルターによる滅菌が定番です。
(無題)
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No.10568-5 - 2022/06/21 (火) 21:48:50 - おお
粉末を溶かしてオートクレーブするような商品はありますが、Gibcoの商品は滅菌した状態で販売していますので、更に滅菌処理(特にオートクレーブ)をすることを想定していないかと思います。グルタミンは特に熱安定性に問題がありますので、入っていれば無理ですね。分解して無害であればまだマシかも知れませんがアンモニアが発生してその細胞毒性が問題になるようです。
(無題)
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No.10568-4 - 2022/06/21 (火) 21:23:22 -
gib
皆様ありがとうございます
LB培地の感覚でオートクレーブかけようとしてましたが、やっぱり瓶をオートクレーブすることにします。(小分けしてFBSを入れるのはFBSを既に多めのスケールで分注しているのもあり、やめておきます)
ありがとうございました
(無題)
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No.10568-3 - 2022/06/21 (火) 14:47:20 - 独り言
普通の感覚では、培地をオートクレーブすることはないかと思います。なんらかの成分が分解されるのでは。
培地の滅菌は普通はフィルター滅菌です。
ただ、すでに液体の培地があるのであれば、瓶のみオートクレーブして乾燥してから、移したら問題ありません。
もしくは、そのRPMIから50mlほど抜いて(50mlチューブなどに)から、FBS90ml加えるのが、一番コンタミのリスクが少ない気がします。
(無題)
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No.10568-2 - 2022/06/21 (火) 13:09:46 - にゅ
空のメディウム瓶をオートクレーブ→乾燥機で乾燥させた後、クリーンベンチ内で液体培地とFBSを混ぜたら良いのではないでしょうか。
グルタミンはオートクレーブしない方が良いはずです。
gibco RPMI
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No.10568-1 - 2022/06/21 (火) 12:52:09 -
gib
gibcoRPMI (グルタミン入り、液体のもの)に関する質問です
500mlの培地に対して約100mlのFBSを入れたいのですが(final 20%FBSにしたい)
そのままだと培地の容器の容量的に無理なので培地瓶か何かに一部移してそこでFBSを入れようかと考えています
この場合、培地瓶に移した後でオートクレーブはした方が良いのでしょうか?
粉のRPMIを作る場合グルタミンはオートクレーブ後に入れていたような気もします
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