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(無題) 削除/引用 No.10554-7 - 2022/06/19 (日) 02:24:44 - あw 1. そのインキュベータ使用している他の人の細胞はどうですか。とりあえずインキュベータ点検をメーカーに依頼しましょう。 2. 保存中か融解時に細胞が死んだのかもしれないです。一部生き残っていればそれが増えればと期待もしますが、残念ですがこう言う場合は全滅することが多いです。仮に生き残っていても接着にとても時間がかるため、その間にanoikisのスイッチ入って死んでしまいます。

(無題) 削除/引用 No.10554-6 - 2022/06/18 (土) 04:57:09 - おお 濾過滅菌で培地がアルカリに偏ったため細胞に影響が出たと思うのであれば、必要な培地の量をフラスコかDishなどに移しておいてそれをCO2 Incubatorに予め入れて培地のpHが安定した頃に細胞を用意してその培地を使うてはあります。

(無題) 削除/引用 No.10554-5 - 2022/06/18 (土) 02:09:24 - おお 濾過滅菌すると炭酸が抜けるので培地がアルカリに偏りフェノールレッドが濃い赤、場合によってはピンクとか若干紫がかった感じになってもおかしくない。 ＞インキュベーター内のCO2濃度は異常なかったです ファイライトなどでCO2濃度を測ったということでしょうか？ 例えば培地（細胞なしで）をDishなどに入れておいて培地の色は明るい赤からオレンジぐらいのあたりに落ち着きますか？あるいは他の細胞は培養できてますか？CO2濃度をどうしても疑ってしまいます。 あるいは培地作成時に炭酸水素ナトリウムを自身で加えるような培地で、大昔テクニシャンが間違えて炭酸ナトリウムを加えて培地が見事アルカリに触れてしまって赤紫になってしまったのを見たことがあります（どうだろうそれをCO2インキュベーターに入れたとしてどうなるかわかりませんけど、、、）。

(無題) 削除/引用 No.10554-4 - 2022/06/17 (金) 16:04:47 - qqq 他の人、またはよその教室から同じ培地組成で育てられる細胞を少し分けてもらって試すとかは可能ですか? とりあえず一晩おいて接着するようなら、フラスコや培地、インキュベーターの問題ではないでしょう。

qqqさん 削除/引用 No.10554-3 - 2022/06/17 (金) 14:35:22 - sek コメントありがとうございます。 > ここ最近、再度培養を再開したのですが、細胞が増えず 同じストックで起こすのに成功した実績は? ストックがうまくいってないように見えます。 ⇒培養を再開する前と同じストック（2021年3月）を使用してました。 　以前は、特に問題なく細胞を起こせたのですが... > 滅菌ろ過をすると、顕著に濃くなった 濃くなったというのはよく分からないが、大気組成下で滅菌に時間がかかっていると朱色というより紫よりになるのは別に普通だと思う。 色は主観なので、酸性側の明らかに黄色はともかく、ピンク、紫で論じても伝わりにくいしなあ…。 ⇒申し訳ありません。pHですと、以前は7.4程度でしたが、　 　今回は7.8程度でした > ・CO2インキュベーター内に緑青が発生していた。 銅チャンバーの製品ですか?問題ありません。 ⇒承知しました。 > ・CO2インキュベーターにフラスコを1晩放置しても、 > 　細胞が丸いままだった（表現が思いつかずすいません）。 > ・2〜3日経過すると、細胞が丸いまま。培地が紫になり、濁りが発生した。 細胞死んでますよね? 顕微鏡で見た感じ、濁りはコンタミですか、死細胞の残骸ですか。 ⇒濁りは、死細胞の残骸のように見受けられました。 別の時期に保存したストックがあればそれを起こしてみるとか。 ⇒別の時期に保存したストックを起こしてみたのですが、同様の結果でした。..

(無題) 削除/引用 No.10554-2 - 2022/06/17 (金) 13:05:15 - qqq > ここ最近、再度培養を再開したのですが、細胞が増えず 同じストックで起こすのに成功した実績は? ストックがうまくいってないように見えます。 > 滅菌ろ過をすると、顕著に濃くなった 濃くなったというのはよく分からないが、大気組成下で滅菌に時間がかかっていると朱色というより紫よりになるのは別に普通だと思う。 色は主観なので、酸性側の明らかに黄色はともかく、ピンク、紫で論じても伝わりにくいしなあ…。 > ・CO2インキュベーター内に緑青が発生していた。 銅チャンバーの製品ですか?問題ありません。 > ・CO2インキュベーターにフラスコを1晩放置しても、 > 　細胞が丸いままだった（表現が思いつかずすいません）。 > ・2〜3日経過すると、細胞が丸いまま。培地が紫になり、濁りが発生した。 細胞死んでますよね? 顕微鏡で見た感じ、濁りはコンタミですか、死細胞の残骸ですか。 別の時期に保存したストックがあればそれを起こしてみるとか。

角化細胞が育たなくなりました。 削除/引用 No.10554-1 - 2022/06/17 (金) 11:13:02 - sek まず初めに、長文失礼します。 似たようなトピックがありましたので、 私も質問させてください。 現在、フラスコにて角化細胞を継代しております。 （温度：37℃、CO2濃度：5%、トレイにミリQ水） 以前（昨年）は、当研究室で特に問題もなく継代できていました。 しかし、ここ最近、再度培養を再開したのですが、細胞が増えず 死んでしまいました。 以前とは、見た目で下記の点が異なっていました。 ・培地製造時、以前よりもピンク色が濃くなっていた気がする。 　（滅菌ろ過をすると、顕著に濃くなった。培地にはフェノールレッドが入ってます） ・フラスコに培地を添加後、CO2インキュベーターに入れると 　数分後紫色に変色していた。 　（インキュベーター内のCO2濃度は異常なかったです） ・CO2インキュベーター内に緑青が発生していた。 ・CO2インキュベーターにフラスコを1晩放置しても、 　細胞が丸いままだった（表現が思いつかずすいません）。 ・2〜3日経過すると、細胞が丸いまま。培地が紫になり、濁りが発生した。 正直、どこから手を付けていいのか分からず困ってます。 ご不明な点等ありましたら、追記させていただきます。 お手数おかけしますが、助けていただけますと幸いです。 宜しくお願い申し上げます。

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