BioTechnicalフォーラム [マウス脂肪組織のパラフィンブロックの作成方法]

マウス脂肪組織のパラフィンブロックの作成方法

No.10547-TOPIC - 2022/06/15 (水) 16:16:09 - 初心者

お世話になっております。
マウス脂肪組織の切片作成に取り組んでおります。
凍結切片だとうまく、形態が保持されず剥離等々でうまくいきませんでした。

そこで、パラフィン切片を作成しようと考えております。
パラフィンブロック作成にあたり、固定、脱水、脱脂、透徹等の条件をご教授いただけないでしょうか？

宜しくお願い致します。
　

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No.10547-8 - 2022/06/17 (金) 18:20:08 - み

>[Re:5] 初心者さんは書きました :
> 私も脱脂されて脂肪細胞内の脂が溶出するため、
> アルコールやキシレンを用いると
> 形態が維持されないのではないかと思ったのですが、
> 文献を探してみると、パラフィンで行なっているものが非常に多く、
> 綺麗に保持されていました。
>
> しかし、文献ではパラフィンブロックの作成過程については省略されており、
> こちらでご教授いただけないかと考えた次第です。

スタンダードなパラフィン切片作製で問題ないはずです。
アルコールやキシレンに通すのは切片をプレパラートに貼り付けた後だから形態は保持される。もちろん脂肪滴は抜けるけど、観たいのは細胞や細胞外成分の領域でしょ？

(無題)

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No.10547-7 - 2022/06/17 (金) 17:42:48 - AA

マウスの褐色脂肪組織ですが、普通にパラフィン包埋して松浪のアミノシランコートガラスに貼ってました。
包埋は以下のとおりです。
80%EtOH 12h
90%EtOH 12h
95%EtOH 24h
100%EtOH 12h x2
トルエン 2h x3
パラフィン 45min x3 (60度)

で薄切は普通のスライディングミクロトームで5um

脱パラは
キシレン 5min x3
100%EtOH 5min x2
90%EtOH 5min
80%EtOH 5min
流水 5min

です。
脂肪部分は抜けてスポンジ状の見た目になります。

(無題)

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No.10547-6 - 2022/06/17 (金) 15:36:57 - qqq

文献があるならその著者に聞けば良いだけでは。

(無題)

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No.10547-5 - 2022/06/17 (金) 15:23:19 - 初心者

ema様

有難うございます。
私も脱脂されて脂肪細胞内の脂が溶出するため、
アルコールやキシレンを用いると
形態が維持されないのではないかと思ったのですが、
文献を探してみると、パラフィンで行なっているものが非常に多く、
綺麗に保持されていました。

しかし、文献ではパラフィンブロックの作成過程については省略されており、
こちらでご教授いただけないかと考えた次第です。

ご意見、誠に有難うございます。

(無題)

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No.10547-4 - 2022/06/17 (金) 15:19:51 - 初心者

TBST run out---様

有難うございます。
界面活性剤は試してみたのですが、
染色過程の剥離が防止できませんでした。

誠に有難うございます。

(無題)

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No.10547-3 - 2022/06/16 (木) 16:10:50 - ema

パラフィンのほうが、途中工程のキシレンで脱脂されてもっと形態が保持されません。

(無題)

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No.10547-2 - 2022/06/15 (水) 22:16:46 - TBST run out---

脂肪組織　染色で検索したら上から３番目に出てきました。
http://immuno2.med.kobe-u.ac.jp/20070112-3377/

すでに試されたのでしたらすみません。