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(無題) 削除/引用 No.10527-3 - 2022/06/09 (木) 15:02:51 - G25 4. transfectantを安定株化して増やして使う。 1.はいわゆるpull-down assayですね。

(無題) 削除/引用 No.10527-2 - 2022/06/09 (木) 14:25:17 - r ２が妥当かなと思います。性質は同じ様なものの方がいいです。（上皮系とか間葉系とかは合わせた方が良いと思います）一般的な話として、ある特定の細胞株の中でみ相互作用する蛋白質というのは特殊なものに限られると思います。相互作用を予想している蛋白質が十分発現していること（もし相手が不明ならば少なくともFlagつけて発現させる蛋白質が、その細胞でも内在性に発現していること、がわかっていれば、よりTF効率の良い細胞で実験しても良いと思います。

トランスフェクション効率が悪い生物で、免疫沈降を行うには。 削除/引用 No.10527-1 - 2022/06/09 (木) 13:12:27 - ゾーン トランスフェクション効率が悪い生物で、FLAG付きのあるタンパク質を強制発現させ、共免疫沈降を行いたいと思います。目的は新規結合タンパク質の同定です。 当然、ウイルスを使えば効率は非常にいいのですが、それ以外で取りうる妥当な方法はありますでしょうか。いくつかの方法を検討しています。 1. 別のトランスフェクション効率の培養細胞に強制発現させて、FLAGタグ付きのタンパク質のついたビーズを作成し、メインの細胞のcell lysateを通す 2. 性質が全く異なる培養細胞で候補を取ってきて、目的の培養細胞で確認する。 3. 効率が悪くてもとにかく量で稼ぐ。

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