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(無題) 削除/引用 No.10503-4 - 2022/05/31 (火) 07:38:14 - おお Transfefctionやプラスミドなどについてはこちらからでは検証できないですが、指摘があるようにHEKなどで高効率で入ることは確認するといいかもしれません。 プラスミドも汚かったり、ニックが入ってたりいろいろな要因でTF効率、発現効率が大きく変わることもありますし、Transfection試薬も相性があったりDNAに対する比率で大きく変わったりするので、Optimizeするほうがいいかと思います。まあ当然ですが細胞の調子にも左右されます。 血球系の細胞はCMVプロモーターでは発現しにくいそうです。CAGに関してのデーターは覚えがありませんが、CMVプロモーターに Chicken beta actinエンハンサーを繋げたようなConstructionだったと思います。 TransfectionやDNA精製に問題が見いだせないのならプロモーターを変更してみてもいいのかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.10503-3 - 2022/05/30 (月) 15:23:52 - KTM 白血球は異物を食べて処理するのが仕事だからね。 プラスミドとトランスフェクション試薬の複合体だって食べられて消化されて終わり。

(無題) 削除/引用 No.10503-2 - 2022/05/30 (月) 15:00:42 - nanasinohito 浮遊系は導入効率が低いので、293T細胞のような接着系と同時進行でやってみて、プラスミドに問題が無いことを確認するのが良いのではないでしょうか。

pCAG-EGFPをトランスフェクションしても光らない 削除/引用 No.10503-1 - 2022/05/30 (月) 12:49:38 - えいじろう 癌培養細胞にpCAG-EGFPをケミカルトランスフェクションしても全く光らないのですが、原因はなんでしょうか？ プラスミドはaddgeneから購入。トランスフェクションのプロトコルは簡単なので間違いはない。2回繰り返して同じ結果です。 癌細胞は白血病細胞で、浮遊性。 培養液は血清ありのRpmi,

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