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(無題) 削除/引用 No.10486-7 - 2022/05/24 (火) 13:11:15 - rdrp 皆様、有益な情報をありがとうございました。どうやら実現可能なようですね。とても参考になりました。

(無題) 削除/引用 No.10486-6 - 2022/05/24 (火) 09:52:03 - おお 失礼いたしましたIIIに見えましたので、、、Pol2なら可能です。 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4836567/ こちらはAAVのコンストラクトだと思われますがCMVにdsRED-mir30を繋げていてmir30の部位に興味あるshRNAを入れているようです。

(無題) 削除/引用 No.10486-5 - 2022/05/24 (火) 09:26:16 - mp ttps://www.addgene.org/111170/ polIIを用いたmiRNAの系になりますが、GFPを目的の遺伝子に変えれば可能と思います。なおこの系ではmiRNA配列を自分で挿入することになりますが、ヒト、マウスの全ての遺伝子に対するtarget配列が公表されていますので、簡単に自作できます。

(無題) 削除/引用 No.10486-4 - 2022/05/24 (火) 09:10:25 - Tracker shRNA用のレンチベクターのマーカータンパクを興味のタンパク質に置き換える、というではダメですか？ pLKO.1とか。

(無題) 削除/引用 No.10486-3 - 2022/05/24 (火) 08:40:25 - rdrp おお様、お返事ありがとうございます。最初の質問では、「Pol-II」ベースの発現カセットと書いております。わかりにくくて申し訳ありません。Pol-IIベースだと本手法は可能でしょうか？

(無題) 削除/引用 No.10486-2 - 2022/05/24 (火) 07:54:14 - おお Pol IIIはたんぱくをコードしないRNAに使われるプロモーターなので（一つ例外有り）、それでたんぱくを発現させるのはチャレンジングな実験で、一般的にはそういう目的には使ってないと思いますが、、、 あと例外はHiston H1だったと思いますが、このmRNAは特殊でPolyA Siteがなく従来と違うTerminationのプロセスをうけます（たしかU7snRNPが認識して切断する？）。そういう意味でも他の遺伝子をいれたりしてどうなるのか読めないところが多いです。 実験的にスプライシングされるIntronにmiRNAがあることが示されている系があるので、そういうのをつかってPol IIで発現するようにしたほうが良くないかと思ったりします。

蛋白質とshRNAのタンデム発現 削除/引用 No.10486-1 - 2022/05/23 (月) 20:09:00 - rdrp プラスミドまたはウイルスベクター(核内で遺伝子発現)のMCS(PolIIベースの発現カセット)にタンデムで遺伝子を2つ繋げて、片方は蛋白質、もう片方はshRNAにする、というようなことは可能でしょうか？そのような商品などご存じではないでしょうか？

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