Bio Technical フォーラム

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培養用6-well plateでHeLa細胞が波紋状に剥がれる現象 トピック削除
No.10481-TOPIC - 2022/05/22 (日) 00:34:33 - Maruo
いつもお世話になっております。

この度は、HeLa細胞を6-well Plateに播種した際に起こった現象について、
皆様のご意見をいただきたいと思っております。

昨晩、トランスフェクションのためにHeLa細胞を6well plateに播種しました。
本日、トランスフェクションを行おうとプレートを覗いたところ、
各wellの中心部から波紋状に細胞が剥がれていました。
昨日、播種した数時間後に確認した時も、中心部への張り付きが悪いような気がしましたが、
特に気にしませんでした。
ですので、波紋状に剥がれていると言うより、波紋状に接着していないのだと考えています。

なお、播種の際、一部継代した細胞は全く問題なく接着していました。

細胞はすぐコンフルになるような数は播種していないので、原因を特定できずにいます。

皆さまの中で、同じような経験をされた方はいらっしゃいますでしょうか。

また、どのような原因が考えられますか?

よろしくお願いします。
 
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No.10481-6 - 2022/05/24 (火) 11:35:08 - おお
では私の知り合いの経験を書いておきますか。

インキュベータの真横にBiosafety cabinetがあってうまくかけませんがそれが接触というか繋がれたような状態になっていて cabinetを使っているときはそのモーターの振動がモロに伝わっていたそうです。そういう状態で細胞をまいてインキュベーターに移すとそんな感じになったようです。

インキュベーター自身が振動しているなら(本来ある程度振動するものなのか、なんか不都合が生じて(ファンの羽が接触するとか?)いるのか原因があるでしょうけど)、ちょっと面倒ですね。

(無題) 削除/引用
No.10481-5 - 2022/05/24 (火) 09:34:25 - mont
以前、同じ症状(細胞が同心円状に接着してしまう)に悩まされて、調べた結果、インキュベーターのモーターや、周囲にある機器のモーターの振動が培養液と共振してしまうと、同心円状、波状に細胞が接着してしまうのだそうです。何と共振するかは偶然の要素が多く予想は困難、振動のバランスを崩すことで解消するしかないそうです。インキュベーターの片側に重い物を乗せて、左右のバランスを崩して解消したことがあります。棚の位置を変えるとか、棚をひっくり返すとか、棚の下に何か挟むとか。でも、しばらくしたらまた突然症状が現れて、、、で、結局、諦めて他のインキュベーターに移動しました。解決法になってないですが、参考まで。

(無題) 削除/引用
No.10481-3 - 2022/05/23 (月) 02:44:22 - おお
細かく振動しているところにある程度以上置いているとなることがあります。ロット製造不良がでたのを、たまたまひいたか。

(無題) 削除/引用
No.10481-2 - 2022/05/22 (日) 19:47:23 - ころっけわーく
私ならとりあえず35mmディッシュや他のメーカーの6well plate、
ロット違いの6well plate等試してみます。
それできちんと接着するようでしたら、ガスプラズマ処理等の
器材側の不良でしょう。

培養用6-well plateでHeLa細胞が波紋状に剥がれる現象 削除/引用
No.10481-1 - 2022/05/22 (日) 00:34:33 - Maruo
いつもお世話になっております。

この度は、HeLa細胞を6-well Plateに播種した際に起こった現象について、
皆様のご意見をいただきたいと思っております。

昨晩、トランスフェクションのためにHeLa細胞を6well plateに播種しました。
本日、トランスフェクションを行おうとプレートを覗いたところ、
各wellの中心部から波紋状に細胞が剥がれていました。
昨日、播種した数時間後に確認した時も、中心部への張り付きが悪いような気がしましたが、
特に気にしませんでした。
ですので、波紋状に剥がれていると言うより、波紋状に接着していないのだと考えています。

なお、播種の際、一部継代した細胞は全く問題なく接着していました。

細胞はすぐコンフルになるような数は播種していないので、原因を特定できずにいます。

皆さまの中で、同じような経験をされた方はいらっしゃいますでしょうか。

また、どのような原因が考えられますか?

よろしくお願いします。

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