全12件 ( 1 〜 12 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.10447-17 - 2022/05/11 (水) 08:20:15 - 散々 ちなみに、今年のモデルナ社のビデオセミナー（SCIENCE & TECHNOLOGY DAY）は５月１７日です。 mRNAの研究者なら必聴です。 SCIENCE & TECHNOLOGY DAY MAY 17, 2022 09:00 AM ET https://investors.modernatx.com/events-and-presentations/events/event-details/2022/Science--Technology-Day/default.aspx

(無題) 削除/引用 No.10447-15 - 2022/05/11 (水) 02:05:39 - おお https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7581537/ モデルナのPre-clinicalなデーターですが、製造工程を普通は変えないと思うので、臨床でも量産という点を除けば同じ方法論だと思います。 optimized T7 RNA polymeraseをつかっていますね。これは散々さんがしめしている改良型のことを言っているのでしょうね。２次構造を取りにくいのがメリットのようです。ただそれでも短い産物ができるようですが。 しめした論文ではmRNA合成後、OligodTで精製してますね。Poly Aがなかったり短かったりするものを極力除くためかもしれません。 ところで質問にかえって、合成したmRNAはCapをつけてますか？それも発現効率に大きな影響を与えるでしょうから。あるいはつけたけど効率が悪かったとか。

(無題) 削除/引用 No.10447-14 - 2022/05/10 (火) 19:31:03 - 散々 >[Re:13] おおさんは書きました : > どういう製造をしているのか興味がありますので詳細求む。 Moderna社の　Annual Science Day （02 June, 2020）の社外発表資料にある。 HPLC精製の論文も紹介されてるな。 https://investors.modernatx.com/events-and-presentations/events/default.aspx https://s29.q4cdn.com/435878511/files/doc_presentations/2020/06/02/Science-Day-Master-Final-(06.02.20)_updated-from-Ed-(1).pdf pdfの６９ページから。 Chapter 2 T7 Enzyme Engineering to Reduce dsRNA Production

(無題) 削除/引用 No.10447-13 - 2022/05/10 (火) 01:13:21 - おお >[Re:12] 散々さんは書きました : > >[Re:11] おおさんは書きました : > > > T7 RNA polを使った合成でTransfectionするというのは研究室レベルでは昔からやられているとおもう。 > > T7 RNA polでは完全長以外の短い産物が多数できてしまい上手くいかない。 > だからこそ、精製が必要な訳だ。 ま、そうだけどモデルナとかがもっている技術ではTruncateな産物は出ないのですか？逆転写酵素といってますがそれもよくわからないですし。どういう製造をしているのか興味がありますので詳細求む。

(無題) 削除/引用 No.10447-12 - 2022/05/08 (日) 19:21:37 - 散々 >[Re:11] おおさんは書きました : > T7 RNA polを使った合成でTransfectionするというのは研究室レベルでは昔からやられているとおもう。 T7 RNA polでは完全長以外の短い産物が多数できてしまい上手くいかない。 だからこそ、精製が必要な訳だ。

(無題) 削除/引用 No.10447-11 - 2022/05/08 (日) 12:02:02 - おお >[Re:10] 散々さんは書きました : > >[Re:8] G25さんは書きました : > > 自ら調製したmRNAとは、どうやって調製したのか？ > > そこだね。形質転換用のmRNAを調製できるところなんて、 > 専用の逆転写酵素を開発したモデルナ社とか、受託を始めた専門の > ベンチャーとかじゃないとだし。 > T7 RNA polを使った合成でTransfectionするというのは研究室レベルでは昔からやられているとおもう。

(無題) 削除/引用 No.10447-10 - 2022/05/08 (日) 10:33:35 - 散々 >[Re:8] G25さんは書きました : > 自ら調製したmRNAとは、どうやって調製したのか？ そこだね。形質転換用のmRNAを調製できるところなんて、 専用の逆転写酵素を開発したモデルナ社とか、受託を始めた専門の ベンチャーとかじゃないとだし。

(無題) 削除/引用 No.10447-8 - 2022/05/08 (日) 09:15:59 - G25 自ら調製したmRNAとは、どうやって調製したのか？ 化学合成とかin vitro transcription? 生物から取った総mRNAのことではないよね(だからoligo-dT云々は的を外している)。 LCすると活性が落ちるというからにはLC前の実績があるということですよね？ ちょっと、説明が丁寧でなくて、よく伝わっていない、誤解を招くところがあるように思います。

オリゴテックス 削除/引用 No.10447-4 - 2022/05/07 (土) 21:58:06 - 散々 mRNAならOligo-dTビーズで精製できるのに、なぜそうしない？

(無題) 削除/引用 No.10447-3 - 2022/05/07 (土) 03:34:10 - BBB 活性とは何の活性のことですか？mRNAですか、それがコードする発現するであろうタンパク質ですか。 mRNAを``細胞にふりかける``とは具体的にどのような添加方法なのでしょうか？普通に培地に添加するのでは難しいのでしょうか。 精製後にmRNAはロスせずに確かにそこにあることはどのようにして確認しておられますか？LC後の回収率は出発材料から計算してだいたい何％でしょうか。そもそもmRNAが期待したほど回収できていないということはないですか？

(無題) 削除/引用 No.10447-2 - 2022/05/07 (土) 02:44:15 - おお あまりあれこれやると分解とか気になるのだけども、、、 透析で除けてないものなどが気になるなら、一度エタ沈してください。またLCのフラクションをそのままエタ沈してもいいのかもしれない。 個人的にはLCよりPAGEで流してゲルから抽出するかなと、、、

mRNAのLC精製後の脱塩処理について 削除/引用 No.10447-1 - 2022/05/07 (土) 00:17:17 - たけい いつも勉強させて頂いております。 自ら調製したmRNAをエタ沈など簡易精製した後、LCで本精製したものを細胞に振りかけています。 ただLC精製するとどうも活性が大きく落ちてしまい、先行研究を再現できません。 LC精製は先行研究を再現しているつもりでそれを支持する良いデータは出てきているのですが、活性のみが再現しません。 カラム・移動相・クラジエント・温度は先行研究と同一のもの、移動相はTEAA/アセニトです。 精製後は限外濾過で水へ十分溶媒置換しています。 対イオンなどの影響なのでしょうか？TEAが除けていないなど。 忌憚のないご意見お待ちしております。

全12件 ( 1 〜 12 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---