全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.10427-3 - 2022/04/28 (木) 22:35:33 - hjy トランスフェクション 試薬と細胞とは相性があるので、使用する試薬に合う方の細胞を選んだらどうでしょうか。ていうか私なら両方やってみていい感じの発現レベルと導入効率の方の細胞を使います。

(無題) 削除/引用 No.10427-2 - 2022/04/28 (木) 13:52:23 - おお HEK293系の細胞も浮遊系が樹立されていて、リコンビナント量産の系として認知されています。InvitrogenがHEK293系の細胞でそういうのに特化した系を商品化してたりすています。 過剰発現によって量産しようということだと思いますが、高発現に合わせたため帰ってうまくいかないといった話もよく聞きます２９３TはT antigenを発現しているのでSV40oriのあるプラスミドをエピソーマルに増幅できそれで大量のタンパク質ができることもありますが、量が多すぎて細胞が追いつかないということもあるようです。特に膜タンパクや分泌タンパクはそう言うので細胞（小胞体など）のキャパを超えてしまってうまく発現してくれないとか、２９３TであってもSV40oriがないプラスミドのほうが良かったということもあるようです。 HeLaの系は私はあまり聞きませんのでわかりません。 CMVかEF1aに関してはこれらの細胞ではさほど気にしなくてもいいかもしれませんが、昔っからCMVで発現させるのになんら障害がなかった細胞です。 翻訳後修飾に関しては細胞によって違うこともありますので、そうなるとそれらの細胞以外の方がいいのかもしれないということもありえると思います。サイトカインなんかで血球細胞を使っていたのがあったような気がします。 そういうことなど踏まえて一度調査をして、結論が出ないこともあるでしょうけど最後はその上で決断すればいいので、この際念入りな調査をしてはどうでしょうか。

タンパク発現で使用する哺乳類細胞の選択 削除/引用 No.10427-1 - 2022/04/28 (木) 12:42:14 - ron 神経細胞で蓄積するある蛋白のフィブリルを研究する目的で、この蛋白を産生できる安定細胞株を樹立したいです。 ➀大量の蛋白産生および➁翻訳後修飾が保たれた蛋白であるの2点を目指したいです。 翻訳後修飾が保たれる必要性があるため、哺乳類細胞へのトランスフェクションを考えております。 HEK293T、HeLaのどちらがお勧めですか。HeLaは浮遊細胞の株があるため、現在はHeLaの方が良いかと個人的に考えております。またプロモーターはCMVまたはEF1aのどちらが良いですか。 ご教授いただければ幸いです。

全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---