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(無題) 削除/引用 No.10426-3 - 2022/04/28 (木) 10:52:42 - G25 pX458は使ったことないですが、oriはpUC系のhigh copyのようですね。 一般的なpUC系ベクターでも、コンストラクトによっては増えが悪いことはあります。おそらく組込んだ遺伝子の毒性によって。 それで足りない分はスケールアップするなり、リッチな培地（例えばTB)にするなりして稼げばいいんじゃないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.10426-2 - 2022/04/28 (木) 01:49:23 - おお pX458をそのままTransformationしても増えないですか？

pX458の大腸菌が増えない・・・ 削除/引用 No.10426-1 - 2022/04/27 (水) 21:34:54 - pX458 よろしくお願いします。 pX458を海外からもらいました。 ここに自分のsgRNA 20 bpをクローニングし、XL10 Goldに形質転換しました。 ライゲーションのコントロールはsgRNAなしです。 そのコントロールではコロニーゼロで、sgRNAを加えた方では100個以上のコロニーがでました。 サテライトもない綺麗なコロニーでした。 このうち４つをピックアップし、2 ml LB ＋Ampで37度で一晩培養しましたが、濁りがとても薄かったです。 これをさらに12時間培養してもそこまで増えてなさそうです（今） pX458ではよくあるトラブルでしょうか？ ご存知でしたら教えてください。

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