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(無題) 削除/引用 No.10418-4 - 2022/05/01 (日) 22:28:19 - KG 同様の実験を行ったことがあるのでご参考までに情報提供します。 自分の場合はR&D systemsの組み換えタンパク質を細胞刺激に使いました。His, FcともCHOで作ったもので、メーカーで活性が確認されていました。定性的な系ではどちらも同様の効果が見られ、定量的な系ではFc融合のほうがやや強い効果が見られました。 生理的な条件に近い実験条件を優先するならばモノマーであるHisを選ぶ意味があるとおもいます。一方で、十分確立された現象ならFcを使っても変なことが起こる心配は小さいだろうし、割り切れるならばFcのほうが二量体であるぶん、効果的に刺激を与えることが期待できると思います。また、Fc融合による安定性への向上で失活のリスク低減ということもあるとおもいます。

(無題) 削除/引用 No.10418-3 - 2022/04/26 (火) 01:57:06 - おお それ以前に両方とも正しいFolding（構造）が保証されているかどうかを考えるべきだと思いますが、そこはクリアーしているのでしょうか。メーカーによっては抗体を作るときの抗原作成に使ったものをそもまま流用して売っているだけで活性はしらんみたいなものもありますし（とくにHisx6 tag）。 また精製純度なども気になります。Hisx6 tagでNiColumnをつかったOneStepの精製なら意外と夾雑物が多いです。

(無題) 削除/引用 No.10418-2 - 2022/04/24 (日) 12:40:16 - み Fcの方は二量体になっていると思う。 またFc融合タンパク質とHis融合タンパク質はそれぞれ何の宿主で作製されていますか？ 大腸菌と哺乳類細胞では翻訳後修飾のされ方やフォールディングの状態が異なるでしょう。

組み換えタンパク質の種類による細胞の反応の差 削除/引用 No.10418-1 - 2022/04/24 (日) 07:17:16 - DCC 組み換えタンパク質で細胞を処理して、反応の差を見ることを考えています。 市販のタンパク質があるので、それを使用することを考えていますが、His tagとFc tagが販売されています。FcよりもHis tagがいいのでしょうか。 Fcの場合200aaで構造が大きい懸念があるのですが、全く同じ会社から、全く同じ配列のFc controlを使えるというメリットはあります。 普通に考えて効果は同じでしょうか。非特異的な結合がないことは確認しています。

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